论文部分内容阅读
口服药物普遍存在胃肠道首过效应,该类药物在吸收入血之前就已经发生了胃肠道代谢,降低了口服药物的生物利用度。对某些药物而言,胃肠道首过效应对生物利用度的影响超过了肝脏首过效应。与胃肠道首过效应相关的主要有转运蛋白P-糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)、Ⅰ相代谢酶细胞色素P450酶系(Cytochrome P450 proteins, CYP450)和Ⅱ相代谢酶尿苷二磷酸葡萄糖转移酶(UDP-glucuronyltransferase, UGT)。本课题分别以P-gp、CYP450和UGT为调控目标,通过制剂技术调控其活性,抑制药物的胃肠道代谢,提高口服生物利用度,并进一步探讨提高药物生物利用度的机制。首先,体外快速筛选了对P-gp、CYP450和UGT具有抑制活性的药用辅料。结果表明,大部分的非离子型表面活性剂和聚合物类药用辅料对3种蛋白均具有一定的抑制活性。同时还筛选出无抑制活性的药用辅料制备阴性参比制剂。药用辅料对P-gp的调控报道较多,文献报道黄酮类化合物对P-gp活性具有调控作用。因此,本课题选择以黄酮类化合物为主要活性成分的酸枣仁来研究对P-gp的调控。体外结果显示,酸枣仁正丁醇萃取部位(STS)可以将罗丹明123的外排率由4.99±50.53降到2.22±0.23,跟维拉帕米(1.344±0.15)相当。体内药代动力学结果显示,STS能将最高血药浓度Cmax和生物利用度AUCo-t分别提高到原药的177%和223%。作用机制研究发现,总黄酮类化合物是STS抑制P-gp活性的主要化学成分,且对P-gp的抑制作用是通过抑制P-gp ATP酶活性实现的。该结果提示应当警惕酸枣仁与P-gp底物类药物联用时的潜在风险。对于CYP450的代谢调控,选择中药复方DOS1227为模型药物(主要成分为在胃肠道发生CYP450代谢的原人参三醇PPT和原人参二醇PPD),分别制备了对CYP450具有抑制活性和无抑制活性的中药复方DOS-1227的自微乳制剂,并对其进行表征。结果显示,2种自微乳的理化性质、体外释放性能、细胞摄取能力和肠道淋巴系统吸收特性均无显著性差异,但体内药代动力学结果显示含有CYP450抑制活性的自微乳与无CYP450抑制活性的自微乳比较,PPT和PPD的相对生物利用度分别提高到3.95倍和2.21倍,与游离药物相比分别提高到8.85倍和4.22倍,上述结果证明含抑制活性药用辅料制剂能够通过抑制CYP450的活性来提高药物的口服生物利用度。对于UGT的调控,以白藜芦醇为模型药物,采用了高压均质法制备了质量可控、工艺简单的亚微乳制剂,并分别使用了无抑制活性的辅料(F68-N)和有抑制活性的辅料(Lab-N),比较了不同亚微乳的体内外代谢特性。结果显示,F68-N和Lab-N具有相似的理化性质、细胞毒性、细胞摄取能力、细胞吞噬途径、肠道淋巴系统吸收特性等,但肠外翻结果显示,Lab-N能明显抑制白藜芦醇的葡萄糖醛酸化代谢,而F68-N则未见显著性抑制作用。体内药代动力学结果显示Lab-N能够将白藜芦醇生物利用度提高到原药组的6.12倍,与F68-N相比提高到5.60倍,同时抑制葡萄糖醛酸化代谢产物的AUCo-12h达46.5%。并且空白亚微乳Lab-N与白藜芦醇的物理混合组并不能抑制白藜芦醇的肠道葡萄糖醛酸化,这说明未将白藜芦醇包封入亚微乳不能起到抑制UGT的作用,这可能是不包封时药用辅料与白藜芦醇吸收不同步造成的。上述结果说明通过使用具有UGT抑制活性的药用辅料制备的亚微乳制剂来调控白藜芦醇的醛酸化代谢的方法可行,Lab-N亚微乳抑制白藜芦醇的肠道葡萄糖醛酸化代谢,并提高了白藜芦醇的口服生物利用度。亚微乳Lab-N中为含有单一抑制UGT活性的药用辅料,因此我们体外评价了不同药用辅料之间联合应用时的协同作用,实验结果显示Labrasol、Labrafil和RH40三种具有抑制活性的药用辅料联合应用,其对UGT的抑制活性大于药用辅料单独使用(P<0.05),体外实验结果说明药用辅料对UGT的抑制活性具有协同作用。药用辅料对UGT酶代谢动力学的影响结果显示,Labrasol、Labrafil和RH40三种具有抑制活性的辅料对于白藜芦醇的主要代谢酶UGT1A1为竞争性抑制剂,对于UGT1A9为混合竞争性抑制剂。最后,为了体内验证药用辅料之间的协同作用,制备更适合口服、具有更强抑制活性的制剂,我们分别制备了含有多种UGT抑制活性药用辅料和无UGT抑制活性的白藜芦醇自微乳,考察了2种自微乳的体内外代谢特性。结果显示,2者的理化性质、细胞毒性、细胞摄取能力、肠道淋巴系统吸收特性等无显著性差异,但实验结果显示有抑制活性的自微乳体外能显著抑制白藜芦醇的葡萄糖醛酸化代谢,体内能够将白藜芦醇生物利用度提高到原药组的12.72倍,与无抑制活性自微乳相比提高6.51倍。上述结果进一步说明含有UGT抑制活性的药用辅料制备的自微乳可以通过调控UGT活性来提高白藜芦醇的口服生物利用度,并且体内验证了多种抑制活性的药用辅料组合可以发挥协同作用。综上所述,本文通过使用酸枣仁提取物调控P-gp,提高了其底物的口服生物利用度。同时使用含有CYP450或UGT抑制活性的药用辅料的制剂技术来抑制胃肠道代谢,提高口服药物的生物利用度,并阐明了对UGT和P-gp的抑制的作用机制,为解决口服药物的胃肠道首过效应的瓶颈问题,及药剂学领域提高口服药物生物利用度的研究和开发提供了理论依据和方法参考。