EF-P(Elongation factor P)是普遍存在于细菌中的蛋白质翻译延伸因子,因其L型结构与tRNA类似,可挽救聚脯氨酸导致的翻译延宕,减缓核糖体的失速效应。EF-P虽然不是细菌生存的必需蛋白,但是对细菌自身的环境适应性以及一些致病菌的毒性维持至关重要。目前有关细菌EF-P的研究集中在它的来源、结构、功能、作用机理及其生物学意义,至今未发现有关于细胞内EF-P自身表达调控的文献报道。本研究以常用药敏靶菌嗜根考克氏菌为试验材料,采用实时荧光定量PCR等现代分子生物学方法研究环境因子作用下的EF-P表达规律及其启动子序列,主要内容和结果如下:1.采用实时荧光定量PCR方法分析了环境因子(温度、pH、部分抗生素)对嗜根考克氏菌ef-p表达的影响。结果表明,嗜根考克氏菌ef-p的表达受环境因子的显著影响,为可调型表达;细菌在最适生长条件下,EF-P表达稳步上调,而在远离最适条件下,EF-P的表达在短时间内亦呈现上调趋势,但是随着时间的延长,上调回落显著;2.采用生物信息学方法分析嗜根考克氏菌全基因组序列,得到嗜根考克氏菌ef-p基因启动子区域位于ef-p基因上游210 bp以内;3.以AcGFP1为报告基因,pET-32a(+)为骨架质粒,采用DNA体外重组方法构建了原核启动子探测质粒pET-32a(+)*:AcGFP1,连接克隆得到的嗜根考克氏菌ef-p基因启动子片段后转化宿主细胞Rosetta(DE3),检测荧光报告基因的表达情况,确定ef-p基因上游210 bp即为ef-p启动子。上述研究结果为阐明嗜根考克氏菌EF-P自身的转录调控分子机制提供了实验依据。