金铁锁毛状根液体培养下次生代谢物质积累规律的研究

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金铁锁(Psammosilene tunicoides)是中国西南地区的民族药用植物,由于长期过度采挖和生境遭到严重破坏,已经处于珍稀濒危状态,列入国家二级保护植物名录。因此,利用生物技术生产金铁锁野生资源替代品对于解决其药源危机具有重要意义。本文以金铁锁的幼叶为外植体,利用发根农杆菌ACCC10060进行浸染,由此获得的毛状根在添加500mg·L-1头孢噻肟钠的固体培养基上进行继代培养,将生长迅速颜色嫩白的毛状根放入液体培养基中,通过对液体培养基、温度、摇床转速、pH、碳源等因子的初步筛选,建立了金铁锁毛状根液体培养体系。在此基础上,研究了不同的培养基成分、不同浓度的激素以及不同的诱导子对金铁锁毛状根生长及皂苷积累的影响,同时还检测了液体培养过程中电导率和还原糖与毛状根生物量的关系。主要研究结果如下:1适合金铁锁毛状根液体培养的基本条件为: MS,温度为25±1℃,pH5.8,摇床转速为100r·min-1。毛状根的生长周期在28d左右,生长曲线呈“s”型。2研究培养基中主要成分如碳源、氮源、磷源等对金铁锁毛状根生长及皂苷积累的影响。结果表明,30g·L-1蔗糖最有利于金铁锁毛状根的生长和皂苷的积累;当NH4+/NO3-的比值为1:2时,为金铁锁毛状根生长及皂苷积累的最佳氮源比例;磷源浓度为培养基1/2MS的1倍时最有利于金铁锁毛状根的生长及皂苷的积累。3研究培养基中不同浓度的激素对金铁锁毛状根生长及皂苷积累的影响。结果表明,分别添加0.5mg·L-1NAA、IAA、IBA时,均能促进毛状根的生长和皂苷产量的提高,其产量较对照品分别提高53.42%、25.55%、79.60%;6-BA、2,4-D均能促进皂苷的合成,但对毛状根的生长均有抑制作用。4诱导子对金铁锁毛状根生长及皂苷积累的影响。结果表明,100ug·mL-1水杨酸有利于金铁锁毛状根的生长和皂苷的积累;酵母提取物抑制毛状根的生长及皂苷的积累;添加2.0mmol·L-1的钙离子为金铁锁毛状根生长及皂苷积累的最佳浓度。5在毛状根液体培养过程中,培养基中的总还原糖呈先上升后下降的趋势,在其对数生长期时,电导率呈下降趋势,并且其下降趋势与生物量的增长(△X)间存在明显的线性关系。因此,在大规模培养中总还原糖及电导率可以作为确定金铁锁毛状根生物量的两个重要的参数指标。
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