目的:Pup-蛋白酶体系统存在于耻垢分枝杆菌和结核分枝杆菌中,用于调控错误折叠蛋白、毒性蛋白、调节蛋白等多种蛋白质的降解过程,并与致病性、持留性和氨基酸循环有关。Pup-蛋白酶体系统中的重要组成成分原核类泛素蛋白Pup、去酰胺酶Dop、蛋白酶体在靶蛋白的识别标记以及降解作用的发挥方面起关键作用。本研究敲除编码Pup-蛋白酶体系统重要组成成分的关键基因,由于敲除多个关键基因,理论上会严重影响并阻断Pup-蛋白酶体系统正常运转,足以清晰的认识Pup-蛋白酶体系统这一整体在分枝杆菌的生理功能中的作用。通过模拟多种生存模式,观察其生长发生的动态变化,以探究Pup-蛋白酶体系统与分枝杆菌多种应激条件下生存的关系,为进一步探究该系统在结核分枝杆菌与机体免疫系统之间相互作用过程中的作用机理提供一定的实验依据。方法:在耻垢分枝杆菌中将编码Pup-蛋白酶体系统的基因pup、dop、prcA、prcB用同源重组的方法进行联合敲除,并在得到的敲除株中回补入这四个基因。检测得到的敲除株和野生株在正常条件、厌氧条件、厌氧加药条件以及营养缺乏条件下的生长情况。结果:在耻垢分枝杆菌中成功敲除和回补pup、dop、prcA、prcB这四个Pup-蛋白酶体系统重要基因。敲除株在正常培养条件下与野生株相比没有显著变化,只是在培养后期生长速度有所减慢。在正式进入厌氧阶段时敲除株的生长速度和活菌数相比野生株有一定程度的下降。厌氧加异烟肼的敲除株的生长速度显著落后于同样厌氧加异烟肼的野生株。在营养缺乏的条件下,敲除株生长速度快速下降。结论:Pup-蛋白酶体系统与耻垢分枝杆菌在应激条件下的生存有关,为Pup-蛋白酶体系统在结核分枝杆菌中与宿主内环境下持留的相互作用关系提供了更多的线索,以及为探索结核分枝杆菌持留致病新机制奠定了基础。