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试验采用杂交瘤技术制备了两株抗阿维菌素(AVM)的单克隆抗体的的杂交瘤细胞株2F2、2H10,对获得的单抗进行了初步的纯化和鉴定,并建立了检测AVM的间接竞争ELISA
(Ci-ELISA)方法。研究结果如下:
用合成抗原AVM-BSA免疫BALB/c小鼠,四次免疫后,采集血清,建立间接非竞争ELISA方法,并测定血清效价。结果表明:包被抗原(AVM-OVA)最适浓度为6.75μg/ml,抗体最适稀释度为1:200。
BALB/c小鼠经AVM-BSA五次免疫后第三天,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,选择PEG1450作为融合剂,两种细胞比例为10:1,融合率88%,阳性率为3.16%。采用有限稀释法经过5次亚克隆,得到两株特异性分泌抗AVM的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2F2、2H10。体内诱生腹水法制备单克隆抗体,收集腹水并进行单克隆抗体特性的鉴定。经抗体亚类试剂盒测定,ELISA检测,染色体计数和SDS-PAGE电泳检测,表明该单克隆抗体的免疫球蛋白亚类均为IgM,上清滴度为1:800,腹水滴度达1:6400,分子质量为925KD,染色体数目介于89~96之间,稳定性良好。
绘制了单克隆抗体2H10的标准曲线,绘制曲线在10~10000ng之间线性关系良好,检测限为10ng,IC50=101ng/ml,单克隆抗体与伊维菌素、多拉菌素、红霉素、白霉素的交叉反应率均小于0.01%。