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2003年的SARS传染性疾病给全球人类的身心健康和社会经济都带来了很大的影响。世界各国的科学家都在加强对SARS-CoV病毒侵染宿主细胞及其对宿主细胞影响的机理研究，以期尽早研发出用于今后能有效防治SARS疾病的预防疫苗及治疗药物。本实验室已经证实SARS-CoV病毒颗粒表面存在Cyclophilin A(CyPA)分子及CD147分子拮抗剂有效阻断病毒对宿主细胞的侵染，根据以往对CyPA分子通过GAG蛋白-CyPA-CD147通路在HIV-1等病毒侵染宿主细胞过程中的促进作用，拟证实CyPA分子通过与SARS-CoV病毒的核衣壳(nucleocapsid，N)蛋白相互结合来促进SARS-CoV对宿主细胞的侵染。 本实验分为三个部分：1．SARS-CoV结构蛋白及CyPA蛋白基因的正确克隆。2．SARS-CoV N蛋白及CyPA蛋白的原核重组表达及其纯化。3．SARS-CoV N蛋白与CyPA蛋白相互结合的实验。利用RT-PCR技术分别从SARS-CoV及人淋巴细胞中获得N及CyPA蛋白的基因cDNA序列，并构建其相应的原核表达载体pET-25b(+)；依照该两个蛋白表达的特性采用 第四军医大学硕士学位论文相应的纯化方案以获得纯度>90%的活性蛋白;分别通过蛋白印迹、免疫共沉淀和BIAcore实验来证实N及CyPA蛋白之间相互作用的关系。结果显示:得到N及CyPA蛋白正确的基因克隆，构建其原核表达载体并获得纯化的具有生物学活性的蛋白分子，证实了N与CyPA蛋白之间存在相互结合的生物学作用。结论:通过分子生物学及生物物理学等技术证实了在SARS一CoV侵染宿主细胞过程中存在N一CyPA一CD147蛋白相互结合、促进病毒侵染的作用途径，N与CyPA蛋白解离常数(KD)为5.07 x10一6M。