拮抗菌B1、B2定殖动态、16S rDNA序列分析及其对两种土传真菌病害的抑菌效果研究

来源 :甘肃农业大学 | 被引量 : 8次 | 上传用户:yangliang0510
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1.拮抗菌筛选及优化组合研究 经平板对峙法筛选,获得的拮抗菌B3、B4、B5、B6与B1、B2(2000年筛选)两个优良拮抗菌比较其抑菌效果。结果表明:四菌株对多种病原菌的抑菌效果存在差异,其中B1、B2、B4对Fusarium oxysporum f.sp.pisi、B1、B3、B5对F.solani f.sp.pisi及B3对Sclerotium cepivorum的抑菌效果较强,抑菌圈直径均在31mm以上,而B3、B5对Botrytis cinerea有较强抑制作用。 将筛选的4菌株与B1、B2无菌液按不同比例混配,测定各组合对F.oxysporum f.sp.pisi的生物活性,根据EC50和共毒系数(CTC)综合分析。结果表明:组合B146和B2346室内抑菌效果显著,其CTC分别高达132.19和147.17,具有明显的协同作用,为最佳组合。 2.拮抗菌B1、B2的抗性标记及在豌豆根部的定殖动态 通过对天然不具有Rif抗性的拮抗菌B1、B2标记,获得抗Rif100ug/ml突变体菌株B1R、B2R。两标记菌株与原拮抗菌在菌落形态上略有差异,但对F.oxysporum f.sp.pisi的抑制作用及对豌豆的促生防病效果保持不变或略有提高。 用B1R、B2R浸种后将豌豆播于接指示菌和不接指示菌的土壤中,观察其在豌豆根部的定殖动态。结果两菌株均能在根围、根际有效定殖,第10d时达到定殖高峰,其中B2在根围的定殖量最高,为1.44×1010cfu/g。随后两菌株定殖量缓慢下降,第25d时,仍达6-7个数量级。 3.大蒜白腐病病原生物学特性测定及B1、B2田间促生试验 经测定大蒜白腐病菌Sclerotium cepivorum.Berk.在10℃-30℃均能生长,5℃以下和30℃以上不生长,20℃为最适生长温度;pH 4.0时菌丝生长速度最快,随pH值增高,菌丝生长速度减慢,pH值为10.0时,几乎不生长;完全黑暗条件下有利于菌丝生长;100%RH和15℃下菌核的萌发率最高。对碳、氮源利用研究表明:该菌能利用多种碳源和氮源,其中葡萄糖、甘露醇和L-鼠李糖有利于菌丝生长,为最适碳源;L-胱氨酸、亮氨酸为最适氮源;而D-半乳糖、L-半胱氨酸、尿素对菌丝生长有抑制作用。 田间小区试验表明,用拮抗菌B1、B2、B1+2拌种后均对大蒜种子萌发、植株幼苗生长有促进作用,可提高产量。其中B1+250倍的促长及增产作用均较强,其增高率和增产率分别为12.57%和11.16%。 4.拮抗菌B1、B2 16S rDNA序列分析 B1、B2经PCR扩增16S rDNA后测序,其序列与GenBank中已知序列比较,结果表明B1、B2与已报道的Bacillus.sp(登录号分别为AB017591和AF411118)的同源性为99%,与室内芽孢染色结果一致,初步确定了两菌株在细菌系统发育学中的地位,暂定为Bacillus.sp。
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