陆地棉光合系统ⅡPsbR基因的克隆与表达分析

被引量 : 4次 | 上传用户:jayslacker
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
新疆是我国最重要的棉花生产基地之一,而干旱、冷害、盐渍等因素一直是限制棉花产量重要因素。光合系统Ⅱ在植物光合作用中发挥着重要的作用,同时在应对环境胁迫中扮演着重要角色。PsbR蛋白是光合系统Ⅱ中的一个小分子蛋白,近年来的研究表明PsbR在光合系统Ⅱ的组装等过程中发挥着重要作用。目的:为了提高棉花的光合作用效率,本实验以棉花(陆地棉)为研究材料对光合系统Ⅱ中的PsbR基因进行克隆,然后进行序列与功能的初步探索,以期为提高棉花光合作用效率奠定理论基础。方法:本研究以拟南芥光合系统Ⅱ PsbR蛋白序列作为探针序列对棉花EST数据库进行同源性检索,然后下载同源性序列并利用CAP3软件拼接,采用PrimerPremier5.0软件对拼接序列设计引物,通过RT-PCR的方法从棉花叶片扩增目的基因序列,然后采用不同的生物学软件对基因序列信息进行分析。采用实时荧光定量的方法对棉花根、茎、叶、花、子房与纤维不同组织中的基因相对表达进行分析;利用酶切的方法构建了植物表达载体PZP35S-GhPsbR并转入野生型拟南芥和烟草中;通过抗生素筛选及PCR方法检测获得的转化植株,并对转基因烟草植株进行了光合与荧光指标的测定。结果:1.通过电子克隆得到一个699bp棉花PsbR基因的序列,经RT-PCR和测序验证后,将其ORF序列提交到Genbank,获得序列登录号为KF944428;预测该基因编码139个氨基酸,蛋白分子量为14.26kDa;2.多序列比对结果显示,棉花PsbR蛋白与牧豆树、马铃薯等具有较高的相似性,与芜菁、菠菜等的相似率较低;在进化关系上,棉花PsbR蛋白与葡萄、蓖麻、杨树等亲缘关系上较近;与黄瓜、芜菁、烟草等进化关系较远;3.实时荧光定量结果表明PsbR基因在棉花不同组织中均表达,但不同组织中表达水平不同,在叶片中表达量最高;4.分别采用4℃、NaCl、ABA和PEG6000四种方式处理后,棉花幼苗叶中的PsbR基因的表达水平都发生了不同程度的下降,随胁迫时间的延长不同胁迫处理下GhPsbR基因的相对表达量呈现出先略微上升随后下降的趋势。5、构建了植物过表达载体PZP35S-GhPsbR,并通过农杆菌转化野生烟草和拟南芥,经抗生素筛选与PCR鉴定,共获得了12株转基因烟草和4株拟南芥植株,转基因植株在表型上与非转基因植株没有明显差异。光合与荧光指标的测定和研究结果也表明,正常生长条件下在烟草植株中过表达GhPsbR基因对烟草幼苗的光合与荧光指标的影响均不显著。结论:从棉花叶片中克隆得到了GhPsbR基因cDNA序列,定位于类囊体膜上,在进化关系上,棉花GhPsbR基因与葡萄等的关系最近,与黄瓜最远;GhPsbR基因在棉花不同组织中均有表达,其中在茎和叶两组织中相对表达水平最高,在其它非绿色组织中则表达量较低;4℃、NaCl、ABA和PEG6000四种不同的胁迫处理实验结果表明,PsbR基因的表达可以响应不同的逆境胁迫;通过棉花GhPsbR基因在烟草中过表达实验,转基因烟草幼苗的表型没有明显变化,在光合与荧光指标上也没有显著的变化。
其他文献
随着经济的不断发展,地区联系越加紧密,公共服务问题的涉及面更广、处理难度更大。医疗服务作为公共服务的一个重要部分,它不仅是政府职责的一部分,也是影响百姓生活的重大问
消化性溃疡病主要指发生在胃和十二指肠的慢性溃疡.根据本病的临床特点,多数中医"胃脘痛"、"肝胃气痛"、"吞酸"、"嘈杂"等范畴.笔者以敛口生肌,活血化淤治疗本病,疗效满意.
目的临床药师对中西医结合治疗小儿喘息性支气管炎的临床疗效及药物经济学研究,为指导临床合理用药提供参考。方法回顾性收集2016年6月~2018年2月我院儿科收治的120例小儿喘
背景:动物体内实验发现,可吸收镁合金支架随着血管结构重塑的完成,可通过缓慢、有序、无毒害降解方式在体内完全降解。目的:探讨新型血管内可吸收镁合金支架在血管内的应用效
本研究是对非英语专业本科学生英语学习动机,英语自主学习能力和英语学习成绩之间的关系进行研究,采用定量研究和定性研究相结合的方法。本研究的对象为湖北大学2012级非英语
定点检测器采集的路段行程时间样本中通常包含连续通行和非连续通行两部分,针对连续通行样本的识别,传统的固定阈值方法无法提供合理的结论.将行程时间样本时间序列化后,利用
随着小冰期的结束,全球气温明显升高,2007年IPCC公布的气候变化综合报告指出:从1900-2000年全球平均温度逐年升高,并预测未来将是一个大幅增温的趋势,但是缺乏我国东北地区的
目的:观察以平肝泻火、清热解毒为主的钩藤方治疗老年单纯收缩期高血压(isolated systolic hypertension,ISH)的疗效。方法:选取来自山东中医药大学附属医院心内科病房及门诊患者,
本文以侵权法中分担损失规则的法律属性与责任类型为客体展开分析与研究。分担损失规则指的是当双方对损害的出现不存在任何过错时,应结合实情让双方分担损失的法律制度,其有
我国在推进城镇化建设中始终遵循的最基本原则就是以科学发展观为指导思想。我们应当把科学发展观中的“以人为本”思想作为中国城镇化发展的主旨和核心内容,与马克思主义基