实验一、硬膜外利多卡因或血清对妊娠晚期大鼠脊髓神经毒性的研究　　 目的：评估硬膜外利多卡因、血清对妊娠期或非妊娠期大鼠血流动力学、神经功能及脊髓后角组织病理学的改变，以探讨妊娠期神经并发症的可能原因。　　 方法：性成熟雌性SD大鼠67只，妊娠20-28天SD大鼠64只，麻醉后在无菌条件下以L3-4间隙为中点作皮肤正中纵切口，切开背脊肌筋膜，切断L3-4间隙韧带，分离L3棘突两侧肌肉，用制备好的无菌硬膜外导管的尖端经L3-4间隙黄韧带破口插入，向头端置管2cm。然后固定并逐层缝合。24小时后，观察大鼠行为学变化，随机分为8组，分别给予下列药物：　　 非妊娠组 NC对照组生理盐水 NL利多卡因组2％利多卡因 NS血清组静置24h大鼠血清 NLS利多卡因+血清组2％利多卡因+血清(1∶1)　　 妊娠组 PC对照组生理盐水 PL利多卡因组2％利多卡因 PS血清组静置24h大鼠血清 PLS利多卡因+血清组2％利多卡因+血清(1∶1)每次给药0.2ml，距前次给药40min后再次给药，共3次。每次给药前、给药后2、5、10、20、30和40min，观察并记录大鼠的SBP及运动阻滞情况。所有大鼠均于用药后24小时，评价并记录其运动神经功能后，处死并解剖大鼠，导管位置正确者脊髓取材(于导管尖端上下各1.5cm)，固定切片并HE染色，光镜下观察脊髓形态学改变。　　 结果：各组均有导管置入蛛网膜下腔或脊髓内部的病例，多在给药后迅速死亡。生理盐水或血清对NC、PC、NS、PS组SBP及运动评分均无明显差异(p＞0.05)。NL、PL组给予2％利多卡因后，SBP明显下降，运动评分明显增高，但两组无明显差异(p＞0.05)。NLS、PLS组给予2％利多卡因+血清(1∶1)后，SBP明显下降，运动评分明显增高，但两组无明显差异(p＞0.05)。NL、PL、NLS和PLS组给药40min后，SBP和运动评分均恢复到给药前水平。给药后20、30min，同一时间点NL比NLS组、PL比PLS组SBP明显降低(p＜0.05)；给药后10min内和给药后20-30min，NL、PL组运动阻滞分别强于NLS、PLS(p＜0.05)。但NL和PL、NLS和PLS之间无明显差异(p＞0.05)。各组动物脊髓形态学无明显差异。　　 结论：1.硬膜外注射0.2ml2％利多卡因、静置24h大鼠血清或2％利多卡因+血清(1∶1)未见引起神经损害。　　 2.硬膜外注射0.2ml2％利多卡因、静置24h大鼠血清或2％利多卡因+血清(1∶1)未发现妊娠鼠神经并发症的发生。　　 实验二、利多卡因或血清对大鼠脊髓后动脉平滑肌细胞内钙离子浓度影响的研究　　 目的：通过观察中毒剂量利多卡因和静置24h血清对体外培养的大鼠脊髓后动脉平滑肌细胞(Posterior Spinal Arteries Smooth Muscle Cells，PSAs-SMCs)细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的影响，分析其对脊髓血管的影响，以探讨脊髓神经并发症的发生机制。　　 方法：1、大鼠脊髓后动脉平滑肌细胞的分离和培养：SD大鼠麻醉后，在无菌条件下完整取出颈部以下脊髓，分离脊髓后动脉，剥离动脉内、外膜，剪成1mm2血管片，用0.2％胶原酶Ⅳ，37℃水浴消化30-40min后，置于10％血清DMEM培养液中于37℃5％ CO2培养箱培养并传代。　　 2、激光扫描共聚焦显微镜测定[Ca2+]i：体外培养的大鼠PSAs-SMCs15皿，Fluo-3/AM负载后，随机分为三组(血清组、利多卡因组和利多卡因+血清组，每组n=5)，在激光共聚焦显微镜下观察给药前后细胞内Ca2+的荧光强度(FI)。血清组依次加入100μL稀释104、103、102、10、0倍的血清(无菌条件下4℃静置24h)储备液(浓度1/104、1/103、1/102、1/10、1)和600mmol/LKCl储备液；利多卡因组依次加入50μ/L利多卡因储备液和KCl储备液；利多卡因+血清组依次加入利多卡因储备液、1/103血清储备液及KCl储备液。　　 结果：终浓度为1/105的血清不引起FI的改变，随着血清浓度增加，FI亦相应升高，且呈浓度相关性(p＜0.05)，但血清终浓度增加至1/102后，FI不再升高；利多卡因引起FI降低(p＜0.05)，而利多卡因降低FI后，终浓度为1/104血清引起FI升高(p＜0.05)。三组细胞给予实验药物后，KCl储备液仍能引起FI升高(p＜0.05)。　　 结论：1、血清终浓度为1/104到1/103时，可升高体外培养的大鼠脊髓后动脉平滑肌细胞内钙离子浓度，且该升高作用呈浓度相关性。　　 2、中毒剂量利多卡因可降低体外培养的大鼠脊髓后动脉平滑肌细胞内钙离子浓度。　　 3、中毒剂量利多卡因预处置后，终浓度为1/104血清仍可升高体外培养的大鼠脊髓后动脉平滑肌细胞内钙离子浓度。