不同产地西青果与诃子成分含量的比较及抗细菌毒力物质研究

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目的:西青果(Chebulae fructus immaturus)为使君子科植物诃子的干燥未成熟果实。西青果具有显著的抗菌抑菌疗效,但是其化学成分与主要活性物质并不清楚。本论文旨在对西青果进行全面化学成分的鉴定与分析,明确抑菌成分,最后对不同产地的西青果和诃子(西青果的成熟果实)的化学成分组成以及活性成分含量进行比较,为西青果的应用提供理论依据。方法:1.通过HPLC-ESI-QTOF-MS/MS技术,对西青果进行成分鉴定与分析。2.以金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)为主要研究对象,采用微量二倍稀释法测定西青果提取物及柯里拉京的最小抑菌浓度(MIC);通过生物膜抑制实验、Q-PCR、抗α-溶血素实验对其抗毒力活性进行研究。3.通过高效液相色谱法(HPLC),建立不同产地的22个批次的西青果和诃子的指纹图谱,并进行分析;对西青果和诃子中的柯里拉京进行定量分析,并通过考察线性、日内和日间精密度、最低检测限(LOD)与最低定量限(LOQ)、重复性和回收率等质量参数,对该方法的适用性和性能进行评估。结果:1.通过HPLC-ESI-QTOF-MS/MS技术,鉴定出44种单体成分,其中以多酚酸类成分为主。2.西青果提取物和其主要成分柯里拉京对金黄色葡萄球菌的MIC分别为1.25mg/m L和25μg/m L;提取物与柯里拉京均能有效抑制生物膜的生长;降低群体感应系统相关基因的表达;抑制α-溶血素的分泌。证明柯里拉京可能为其抗感染的主要活性成分。3.西青果和诃子的指纹图谱显示存在约40个共同峰,所有样品呈一致的色谱模式,但峰值丰度有所不同。其中保留时间为27分钟存在特征值,仅存在于诃子中。通过定量分析发现,在所有批次的样品中,柯里拉京较其它成分含量最高,范围为5.59 mg/g至13.58 mg/g。从产地看,印度尼西亚的诃子果实中柯里拉京的含量最高;从发育程度看,未成熟诃子果实(西青果)中柯里拉京的含量最高。结论:1.运用HPLC-ESI-QTOF-MS/MS技术测定西青果的成分组成,该方法具有简单快捷、稳定性好、灵敏度高等优点。2.西青果提取物和柯里拉京对金黄色葡萄球菌具有较好的抗毒力活性作用,且耐药性较弱,为开发新型的抗菌药物提供理论依据。3.利用指纹图谱法对不同产地的西青果、诃子的化学成分进行比较,该方法可以较全面地反映西青果、诃子中所含化学成分的种类与数量,具有科学性和全面性;通过HPLC定量分析测定西青果、诃子中柯里拉京的含量,该方法准确性高,重现性好。
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