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目的siRNAs(Short interfering RNAs)在哺乳动物体内能够介导序列特异性基因表达的抑制。最近载体介导合成短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)的方法取得一些进展。MDR1 基因产物P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)过表达导致肿瘤细胞多药耐药(Multidrug resistance,MDR)。本研究利用发卡siRNA 表达载体转染耐药的人乳腺癌株(MCF-7/AdrR) 和人红白血病细胞株(K562/ADM)逆转肿瘤多药耐药。方法构建2 个发卡siRNA 表达载体,分别转染MCF-7/AdrR 和K562/ADM 细胞。RT-PCR分析MDR1 mRNA 的表达, Western Blot、免疫细胞化学方法和流式细胞术分别检测P-gp 的表达,流式细胞术和MTT 法分别检测MCF-7/AdrR 和K562/ADM 细胞的凋亡、细胞内罗丹明(Rh123)的浓度以及对阿霉素的敏感性,激光共聚焦荧光显微镜测定细胞内柔红霉素的稳态积累。结果在转染MDR1-A 和MDR1-B 发卡siRNA 表达载体的MCF-7/AdrR 细胞,RT-PCR 检测结果显示MDR1 基因mRNA 表达分别减少到40.9 % (P < 0.05),30.1% (P < 0.01) (瞬时转染) 和37.6 % (P < 0.05),28.0 % (P < 0.01) (稳定转染);在K562/ADM 细胞,MDR1 基因mRNA 表达分别减少到39.1 % (P < 0.05),30.8% (P < 0.01)(瞬时转染)和35.9 % (P < 0.05),27.5 % ( P < 0.01)(稳定转染)。Western Blot、免疫细胞化学方法和流式细胞术检测结果均显示MCF-7/AdrR 和K562/ADM 细胞P-gp 表达被明显而特异地抑制。转染后MCF-7/AdrR 细胞对阿霉素的耐药性由162-fold 减低到109-fold, 54-fold (瞬时转染) 和108-fold, 50-fold (稳定转染);K562/ADM 细胞对阿霉素的耐药性由79-fold 减低到39-fold, 34-fold (瞬时转染)和38-fold, 30-fold (稳定转染)。并且发卡siRNA 表达载体增加MCF-7/AdrR