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目的:肝脏缺血再灌注(ischemia reperfusion,IR)损伤是临床常见的病理过程,常发生在休克、创伤、肝切除和肝移植后,可导致术后肝功能恢复延迟甚至移植肝无功能,严重影响肝脏手术的临床效果与患者生存预后。延长肝缺血耐受时间、减少缺血再灌注损伤、保护移植肝功能是临床亟待解决的重要问题。本研究旨在探讨小鼠肝脏缺血再灌注过程中,IRF-1表达对细胞自噬的影响,IRF-1调节JNK通路对肝缺血再灌注损伤自噬与损伤的作用,研究肝脏缺血再灌注损伤的可能机制,为肝脏缺血再灌注损伤的防治提供可能的方法。方法:雄性成年C57BL/6小鼠,随机分为假手术组(Sham组),缺血再灌注0h、2h、6h、12h、24h组。采取夹闭肝左叶和中叶肝门制备70%肝缺血再灌注模型,检测各组小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平。HE染色观察肝脏组织病理学改变,TUNEL法观察肝细胞凋亡情况。免疫组织化学检测各组肝组织PCNA、Bcl-2和p-JNK的阳性表达,透射电镜检测小鼠肝组织细胞内自噬体的数量,Western blot检测小鼠肝组织IRF-1、JNK、p-JNK、Beclin-1、p62、LC3、Bcl-2、Caspase-3与Cleave Caspase-3蛋白表达变化。采用肝细胞系AML12细胞建立缺氧/复氧(H/R)细胞模型以模拟肝缺血再灌注,进一步验证体外实验IRF-1调控JNK诱导自噬性死亡在缺氧/复氧中的作用。通过Ad IRF-1、JNK si RNA预处理转染AML12细胞,Western blot检测各组AML12细胞IRF-1、JNK、p-JNK、Beclin-1、p62、LC3、Bcl-2、Caspase-3与Cleave Caspase-3蛋白表达变化,免疫细胞荧光检测AML12细胞p-JNK的表达变化,共聚焦显微镜和透射电镜观察各组AML12细胞内自噬体变化。使用雷帕霉素(Rap)与3-MA预处理AML12细胞,MTT检测各组AML12细胞生存率,Western blot检测各组AML12细胞内Beclin-1、p62、LC3、Bcl-2、Caspase-3与Cleave Caspase-3蛋白表达变化,以明确自噬对H/R处理诱导AML12细胞凋亡的影响。结果:IR组小鼠血清ALT、AST水平随着再灌注时间增加明显上升(P<0.05);IR组小鼠肝组织随着再灌注时间增加损伤逐渐加重,肝组织细胞水肿、气球样变,肝窦区狭窄、中央静脉淤血和肝细胞坏死等病理变化。与Sham组相比,IR组小鼠肝组织凋亡细胞随着再灌注时间的增长而明显增多(P<0.05)。与Sham组相比,IR组小鼠肝组织PCNA阳性表达的细胞数随着再灌注时间增加而升高,在6h达到高峰。IR组小鼠肝组织Bcl-2阳性表达的细胞数随着再灌注时间增加而减少,在12h表达最少。IR组小鼠肝组织p-JNK阳性表达的细胞数在再灌注2h达峰值,然后随再灌注时间增加而减少。与Sham组相比,再灌注6h组小鼠肝组织的自噬体的数量明显升高。IR组小鼠肝组织IRF-1、JNK与p-JNK蛋白水平随再灌注时间增加而升高,且均在2h达高峰,凋亡蛋白Cleave Caspase-3蛋白水平随着再灌注时间增加而升高,在6h达高峰,Caspase-3蛋白水平没有明显变化,而抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白水平减少。自噬相关蛋白Beclin-1、p62、LC3表达水平增加,在6h达高峰。Ad IRF-1组AML12细胞IRF-1、JNK与p-JNK蛋白水平较Ad GFP组升高。免疫荧光结果Ad IRF-1组AML12细胞p-JNK表达水平较Ad GFP组升高。相比Ad GFP组,Ad IRF-1组AML12细胞自噬相关蛋白Beclin-1、p62、LC3表达水平增加,Caspase-3与Cleave Caspase-3蛋白水平升高,而Bcl-2蛋白水平降低。相比si RNA-NC组,JNK si RNA组AML12细胞JNK和p-JNK表达减少,Beclin-1、p62、LC3、Caspase-3与Cleave Caspase-3水平降低,而Bcl-2蛋白水平升高。共聚焦和透射电镜结果说明Ad IRF-1组AML12细胞自噬体增加,而JNK si RNA组自噬体减少。使用自噬激动剂和抑制剂预处理AML12细胞后,Rap组AML12细胞生存率较IR组明显降低(P<0.001),而3-MA组AML12细胞生存率较IR组明显升高(P<0.01)。Rap组Beclin-1、p62、LC3与Caspase-3与Cleave Caspase-3蛋白表达水平均较IR组显著升高,而3-MA组较IR组明显减少。结论:小鼠肝脏缺血再灌注诱导肝组织IRF-1与JNK信号通路表达增加,自噬水平升高,自噬体数量增加,自噬相关蛋白Beclin-1、p62、LC3的表达增高。同时,凋亡相关蛋白Cleave Caspase-3蛋白表达增加。肝缺血再灌注过程中,IRF-1通过调控JNK信号通路增加肝细胞自噬水平,促进肝细胞凋亡,加重缺血再灌注损伤。