三磷酸腺苷结合盒式转运蛋白（ATP binding cassette, ABC）是目前发现的最大的膜蛋白家族之一,广泛分布于从细菌到人类等各种生物体中,每个成员都含有两个高度保守的ATP结合区（ATP binding cassette）,可通过结合ATP发生二聚化水解释放能量,并形成一个跨膜通道从而实现多种底物的跨膜转运。可转运的底物包括：无机离子无机酸、氨基酸、脂类、糖类、多肽、各类药物、细胞代谢产物等。有的ABC转运蛋白专一性很高,只能转运特定的物质；有的ABC转运蛋白可转运结构完全不同的物质。本文从克隆植物乳杆菌ZJ316的细菌素转运蛋白基因出发,对其编码的蛋白PlnH进行了生物信息学研究,在外源表达菌株中得到了表达后并对其产生诱导蛋白的条件进行了优化,初步纯化出了目的蛋白。这就不仅使得植物乳杆菌的细菌素转运蛋白丰富了ABC转运蛋白家族,为ABC转运蛋白的研究提供了更深入的研究材料；也为以后的科学研究和微生物的利用提供了新的思路。本研究从实验室分离保存的一株高效产细菌素的植物乳杆菌ZJ316（Lactobacillus plantarum ZJ316）出发,采用改良后的CTAB法提取其总基因组,通过NCBI数据库和软件Primer Premier5.0设计钓取细菌素ABC转运蛋白的引物,并在适合的条件和反应体系中克隆出ABC转运蛋白的基因。结果显示该基因序列共由1377bp组成,与NCBI数据库上公布的plnH基因同源性为99%,蛋白的氨基酸残基数为458个；分子质量约为50.0kDa,理论等电点pI=9.44,属于稳定性蛋白；二级结构约有51.97%的α-螺旋,11.14%的β-折叠,36.90%的无规则卷曲；PlnH蛋白在前100个氨基酸存在着较强的疏水性,其后的部分亲疏水性交替排列着；从第19个AA到第41个氨基酸存在一个跨膜结构域,具有两个低复杂度序列,一个卷曲螺旋区域,可能存在信号肽；存在5个N-糖基化位点、9个蛋白激酶C磷酸化位点、11个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、1个cAMP和cGMP依赖性蛋白激酶磷酸化位点、3个N-肉豆蔻位点。为了以后能够在体外研究该蛋白的结构特征等,实验构建了重组表达质粒pET28a-plnH,并根据pET28a多克隆位点特征设计了BamH I和Xho I两高效酶切位点。通过菌落PCR、质粒单双酶切、基因测序验证了重组质粒的正确性。利用SDS-PAGE电泳验证了细菌素ABC转运蛋白PlnH在18℃过夜诱导条件下有所表达后,对其诱导表达体系进行了优化,结果表明：当诱导温度为30℃、IMPTG浓度为1.0mmol/L,加入IPTG时的OD600=0.7、诱导表达时间为4h时蛋白表达量最大,同时蛋白PlnH以包涵体的形式存在于细胞内。利用Ni2+螯合亲和层析柱对其的分离纯化显示：在用500mM咪唑洗脱缓冲液洗脱后出现一清晰的单一目的条带,但对其的复性率为零。