新型饲料添加剂雪莲果低聚果糖的制备及其生物活性评价

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本文以雪莲果(Smallanthus Sonchifolius)为原料提取低聚果糖,对雪莲果低聚果糖提取过程中脱色、脱蛋白工艺、纳滤分离纯化技术进行了较为系统的研究,并对提取所得到的雪莲果低聚果糖进行了纯度鉴定和结构分析,对其生物活性进行了探讨,具体如下:1、研究了超声波辅助法和热水浸提法提取雪莲果低聚果糖的提取工艺,对料液比、温度、时间分别进行了单因素试验和L9(34)正交试验,运用方差分析、极差分析、回归分析对提取方法以及提取过程中影响提取率的因素进行了统计分析,并对最优化组合问题进行了定量研究,建立了具有良好预测性能的雪莲果低聚果糖提取条件的最优回归模型:y=0.099+0.0002x1—0.040x。结果表明:影响低聚果糖得率的主次因素依次为料液比、提取时间、提取温度;最佳提取工艺为:采用热水浸提法,料液比1:3、浸提时间60min、浸提温度25℃,在此优化条件下,低聚果糖平均得率为0.0987。2、考察了D72、D315、S-8、X-5、D101这5种大孔树脂对雪莲果低聚果糖提取液脱色、脱蛋白效果以及低聚果糖保留率的影响,选择了D101树脂作为工作树脂。在静态吸附实验中,确定了树脂的吸附饱和时间,根据数据拟合出色素、蛋白质的Freundlich吸附等温模型。在动态吸附实验中,确定了料液的最佳pH=2~3,此pH条件下色素、蛋白质吸附率均较大。洗脱流速为1.5BV/h,此条件下可处理6BV的料液并保持脱色率在90%以上。3、经纳米膜纯水系数测定,线性关系成立,可通过与实测膜通量值相比较,来检验非平衡热力学模型的实用性及准确性。通过操作因素对膜分离性能的影响试验发现,随着NaCl溶液浓度的增大,膜截留率下降,盐的透析增加;在进行脱盐脱糖实验时,选择在酸性条件下(pH=1~3)进行可以有效降低单价盐的截留率,提高分离效率,强化脱盐脱糖效果。就脱盐效果而言,应在保证一定的渗透通量下采用较低的循环流量,在5-10HZ之间较为合理。从耗能角度考虑,选择操作压力1.5bar-2.0bar,采用一级纳滤膜透析4次,二级纳滤膜恒容透析5次所得产品中还原糖含量为4.7%,低聚果糖含量为94.25%。4、经HPLC测定发现,雪莲果低聚果糖样品中蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖的质量分数分别为20.6%、51.4%、23.1%,经二次纳滤纯化的雪莲果低聚果糖样品中低聚果糖含量为95.1%。经质谱分析发现,雪莲果低聚果糖样品中含有5种分子量不同的组分(其分子量分别为180、342、504、666、828),这5种组分分别是单糖(葡萄糖和果糖)、二糖(蔗糖)、三糖(蔗果三糖)、四糖(蔗果四糖)、五糖(蔗果五糖)。IR分析结果显示,雪莲果低聚果糖主要是由β-呋喃果糖组成。经氢谱和碳谱核磁共振分析发现,雪莲果低聚果糖平均包含4个果糖单元。5、通过对雪莲果低聚果糖体外清除超氧阴离子自由基、体外抗肝组织自发脂质过氧化作用以及对H2O2诱导的红细胞氧化溶血作用影响的研究发现,雪莲果低聚果糖具有一定的抗氧化活性;通过体外增菌实验,表明雪莲果低聚果糖浓度达到或高于15g/L时,对双歧杆菌和乳酸杆菌有明显的增殖作用。通过在日粮中添加雪莲果低聚果糖提取物,对不同添加量的肉鸡血液生化和激素指标进行检测,并对不同组肉鸡的后肠双歧杆菌、乳酸杆菌和大肠杆菌的数量进行比较,表明雪莲果低聚果糖具有显著的抗氧化、降血脂和促进双歧杆菌、乳酸杆菌增殖的作用,并能有效地控制肠道中大肠杆菌的数量,是一种很好的新型饲料添加剂。
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