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选择的半抗原为双氯芬酸Diclofenac(DCF)，将其与牛血清白蛋白（BSA）以活化酯法反应合成偶联物DCF-OVA，作为抗原免疫活体动物（新西兰大白兔），制备得到多克隆抗体。ELISA法检测效价可达到1:51200。采用混合酸酐法，使双氯芬酸与卵清蛋白(OVA)偶联，以得到的产物DCF-OVA作为包被原，并以双氯芬酸作为参与竞争反应的抗原，建立间接竞争ELISA（ic-ELISA）检测方法，曲线方程为y=-17.89x+61.94，相关系数R2=0.9687，线性范围为10-105ng/L，检测限为27ng/L。用生物素-亲和素系统标记抗体，建立对传统ELISA的改良方法BA-ELISA法检测双氯芬酸，分析得标准曲线方程为y=-13.834x+54.216，相关系数R2=0.9937，线性范围为1-105ng/L，检测限为2.6ng/L。使用这两种ELISA方法检测自来水中的双氯芬酸，回收率分别为96.3-106.7%和93.5-118.4%。建立间接实时荧光PCR（rt-IPCR）法测定水样中的双氯芬酸，标准曲线方程为y=-2.312x+13.118，相关系数R2=0.9836，线性范围为10-2-102ng/L，检测限为0.0017ng/L。考察间接竞争rt-IPCR测定自来水样中双氯芬酸方法的稳定性，多次测量不同样品的变异系数均小于5%，结果令人满意。