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干细胞因子(stem cell factor,SCF)也被称为肥大细胞生长因子、steelfactor,是酪氨酸激酶受体c-kit的配体。它是一种具有诱导早期造血干细胞,原始造血祖细胞存活、增殖和分化功能的重要造血因子。SCF以可溶型(soluble SCF,s-SCF)和膜结合型(membrane-bound SCF,m-SCF)两种形式存在,s-SCF除了可以动员造血干细胞到外周血,还可以通过自分泌形式促进肿瘤细胞的恶性增生,而m-SCF具有粘附分子样的作用,是造血微环境的组成成份,缺乏会导致造血干细胞重建造血能力障碍,由于造血微环境中细胞接触紧密,m-SCF/c-kit可能以并置性机制发挥作用。为了探索m-SCF在急性髓系白血病中的作用,本文采用realtimePCR的方法检测了24例正常人和54例急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)骨髓单个核细胞中s-SCF,m-SCF,c-kit的表达情况,克隆并构建了s-SCF前体的真核表达质粒pTARGET-s,采用Overlap PCR法去除外显子6序列,进一步构建m-SCF的表达质粒pTARGET-m,DNA测序鉴定。通过脂质体介导分别将上述载体和空载体pTARGET转染K562细胞,用G418筛选稳定表达细胞株,并用RT-PCR、Westernblotting法鉴定。通过CCK-8细胞增殖实验以及集落形成实验研究不同细胞株体外增殖特点,并通过裸鼠体内成瘤实验研究其促瘤效应。结果发现AML患者与正常人骨髓细胞c-kit mRNA水平差异有统计学意义(P=0.004,P＜0.05);s-SCF mRNA水平差异无统计学意义(P=0.923,P＞0.05);m-SCFmRNA水平差异有统计学意义(P=0.038,P＜0.05)。成功构建的稳定表达s-SCF和m-SCF的K562细胞株分别形成了自分泌环路和并置性作用方式,在平底培养条件下,细胞接触较少,虽两者均能促进白血病细胞的增殖,但s-SCF的作用更为显著;在U底培养条件下,细胞被动聚集、相互接触,导致m-SCF介导的并置性作用更为显著,其促白血病增殖效应显著高于s-SCF;集落形成实验结果显示K562-M形成的集落不仅数量多,而且集落形态更大,进一步证明在细胞聚集接触的条件下,m-SCF/c-kit介导的并置性作用更能促进这些恶性细胞的增殖。裸鼠体内成瘤实验表明,K562-S和K562-M形成的肿瘤生长速度显著高于K562-V(P＜0.01),且K562-M的生长速度也显著高于K562-S(P＜0.01)。处死裸鼠后剥离的肿瘤组织,K562-S和K562-M所形成的肿瘤体积、质量显著大于K562-V(P＜0.01),且K562-M肿瘤体积、质量也显著大于K562-S(P＜0.01)。体内实验结果提示表达s-SCF和m-SCF的白血病细胞K562在裸鼠体内成瘤性增强,并且m-SCF比s-SCF更能促进肿瘤的形成和生长。以上实验表明,m-SCF通过并置性作用机制促进白血病细胞的增殖,由于造血微环境中细胞间紧密接触,提示m-SCF/c-kit可能通过并置性作用机制对部分AML的发展起促进作用。