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目的:神经母细胞瘤是儿童时期最常见的实体肿瘤之一。因其具有高度遗传异质性,且恶性度较高,从而增加了其复发可能,使临床治疗面临巨大挑战。顺铂为一种常用的抗肿瘤药物,在神经母细胞瘤的治疗中占重要地位,缺氧是肿瘤对顺铂治疗不敏感的主要因素之一,肿瘤缺氧微环境使缺氧诱导因子1α表达升高,从而上调碳酸酐酶Ⅸ的表达,使细胞适应缺氧微环境,乙酰唑胺是一种碳酸酐酶抑制剂,可抑制碳酸酐酶Ⅸ的表达,从而保护肿瘤细胞免受缺氧的干扰。本文研究了乙酰唑胺与顺铂联合应用对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系增殖、迁移及凋亡的影响,为临床治疗提供新的思路。方法:1.体外培养人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞株,采用不同浓度的顺铂（0、0.25、0.5、0.75、1.5、3、6ug/ml）及乙酰唑胺(0、1×10-5mol/L、2×10-5mol/L、4×10-5mol/L、8×10-5mol/L、16×10-5mol/L)分别处理SH-SY5Y细胞株24、48、72小时。上述不同浓度的顺铂联合乙酰唑胺(4×10-5mol/L)作用于SH-SY5Y细胞株,应用MTS比色法检测细胞存活率,分别计算出单用顺铂及当两药联合应用时顺铂的半数抑制浓度（IC50值）。2.分别设立对照组,乙酰唑胺组,顺铂组,乙酰唑胺联合顺铂处理组,同等条件下培养处于对数生长期的SH-SY5Y细胞株24小时,通过光学显微镜观察不同处理组细胞在形态学上的变化。3.应用细胞划痕实验及Transwell迁移实验评估不同处理组的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞株的迁移距离及迁移能力。4.应用流式细胞仪和Western blot实验检测凋亡率及凋亡相关蛋白B cl-2、Bax、caspase-3的表达。结果:1.0、0.25、0.5、0.75、1.5、3、6ug/ml的顺铂分别作用于SH-SY5Y细胞24小时,细胞存活率分别为:100±1.913%、99.55±3.401%、97.16±4.722%、96.26±5.473%、92.84±5.534%、88.52±4.605%、68.13±3.319%。顺铂浓度为3ug/ml时,细胞活力有所下降（P＜0.05）;顺铂作用48小时,浓度为1.5ug/ml时细胞存活率开始下降,顺铂浓度达到3ug/ml时,细胞存活率下降明显;顺铂作用72小时,顺铂浓度为1.5ug/ml时细胞存活率明显下降。2.不同浓度的乙酰唑胺处理SH-SY5Y细胞株24、48及72小时后各组细胞存活率变化不明显,处理组与对照组间无统计学差异（P＞0.05）。3.单独应用顺铂时,其IC50值为4.757ug/ml,而当两药联合时,IC50值为2.742ug/ml,两药联合后顺铂IC50值降低了约42.4%。4.通过光学显微镜观察四组细胞的形态学变化,可见阴性对照组细胞数目最多,细胞大小均一,胞质均匀,生长状态好;乙酰唑胺组细胞在数量上较对照组无明显变化,可见部分细胞触角较对照组减少,细胞变圆,有少量细胞碎片及代谢产物堆积;顺铂组细胞数量明显减少,可见较多的细胞碎片及代谢产物堆积,细胞皱缩变圆,形态多不规则,有较多的成簇状细胞团;联合处理组细胞在数量上明显减少,细胞碎片及代谢产物堆积明显增多,细胞体积较小,形态不规则。5.不同处理组SH-SY5Y细胞株培养24小时。与对照组相比,乙酰唑胺处理组细胞愈合能力无明显变化（P＞0.05）;顺铂处理组细胞的愈合能力下降,与对照组相比,差异有统计学意义（P＜0.01）;而乙酰唑胺联合顺铂组可显著抑制SH-SY5Y细胞的愈合能力（P＜0.01）。6.Transwell小室迁移实验研究不同处理组的SH-SY5Y细胞株的迁移能力。较正常对照组来说,乙酰唑胺处理组细胞穿过小室的细胞数无明显减少;顺铂处理组穿过小室的细胞相对减少;乙酰唑胺联合顺铂处理组穿过小室的细胞数目明显减少,差异有统计学意义（P＜0.01）。7.流式细胞术检测不同处理组SH-SY5Y细胞株凋亡率,与空白对照组相比,乙酰唑胺处理组细胞凋亡率有所下降;顺铂治疗组细胞凋亡率稍增高,较对照组相比差异有统计学意义（P＜0.01）,而乙酰唑胺联合顺铂治疗组细胞的凋亡率明显增加（P＜0.001）。8.Western blot检测不同处理组细胞的凋亡及增殖相关蛋白的表达,结果显示:对照组细胞的P53及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及caspase-3水平与基线水平相当;单独应用乙酰唑胺组可见P53较对照组无明显变化（P＞0.05）,而抗凋亡蛋白Bcl-2降低,凋亡蛋白Bax和凋亡蛋白caspase-3增加,差异均有统计学意义（P＜0.01）;单独应用顺铂时,P53即有明显的增加,抗凋亡蛋白Bcl-2降低,凋亡蛋白Bax和凋亡蛋白caspase-3增加,与对照组比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）;而当两种药物联合应用时,抗凋亡蛋白Bcl-2降低明显,凋亡蛋白Bax和凋亡蛋白cas pase-3也明显增加,且P53蛋白表达上调,经统计学分析,较对照组及单药处理组差异均有统计学意义（P＜0.01）。结论:1.顺铂能够抑制人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖,其作用效果与作用时间及药物浓度密切相关。2.单独应用乙酰唑胺时对SH-SY5Y细胞的增殖无明显影响,且与作用时间及药物浓度无明显关系。乙酰唑胺联合顺铂可使SH-SY5Y细胞的增殖明显受到抑制,并且可以降低顺铂的IC50值,提示乙酰唑胺具有化疗增敏作用,其可能的作用机制为乙酰唑胺与顺铂联合时促进P53蛋白表达。3.乙酰唑胺联合顺铂治疗可以抑制人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的迁移能力。4.乙酰唑胺、乙酰唑胺联合顺铂均能促进人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的凋亡,其作用机制与上调促凋亡蛋白、下调抗凋亡蛋白的表达有关。