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本论文成功将雷竹(Phyllostachysvialascens)PvFT1基因转入水稻,转基因水稻在试管中即可开花;基因枪轰击洋葱表皮细胞后,发现PvFT1蛋白定位在细胞核;原核表达实验结果表明,PvFT1蛋白主要以包涵体的形式存在;确定了PvFT1基因至少存在2个拷贝,每个拷贝受不同的启动子调控。本论文的主要结果如下:
1.将CaMV35S::PvFT1转入水稻中,转基因后的愈伤组织分化会受影响,且生根困难。部分转基因苗在试管里即可开花,开花后死亡。
2.通过基因枪轰击法,将pCHF3-PvFT1重组载体轰击入洋葱表皮细胞,用荧光显微镜观察,表明PVFT1蛋白定位在细胞核中。
3.将pET28a-PvFT1重组质粒在原核表达系统中表达,蛋白电泳结果表明:原核系统中可表达出分子量约为20kDa的目的蛋白,主要以包涵体的形式存在。但不同诱导时间、不同温度对PvFT1基因蛋白的诱导表达差异明显。
4.通过PCR扩增获得PvFT1基因的2条启动子序列,序列分析结果显示,与长的启动子(proL)序列相比,短启动子(proS)存在1061bp的缺失,启动子序列与基因全长序列分析后,发现PvFT1基因至少存在2个拷贝,每个拷贝分别受不同的启动子驱动,即proL驱动PvFT1a拷贝和proS驱动PvFT1b拷贝。
5.根据PvFT1a基因的启动子序列设计引物,扩增出不同大小片段的启动子,构建了PvFT1基因启动子缺失元件的表达载体,并转入农杆菌侵染拟南芥,分析了各个不同缺失的启动子的活性。