第一部分 卵巢癌耐药细胞株体外模型的建立及相关研究 目的：人类肿瘤细胞对多种互不联系的不同结构和作用特异性的药物存在交叉耐药，这种现象被称为多药耐药(Multidrug resistance，MDR)，是卵巢癌化疗的主要障碍。传统的MDR显型的内在机制是细胞过度表达MDR1基因编码的170-kDa的跨膜糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)，MDR1基因属于ABC(ATP-binding Cassette)转运蛋白家族的一员，其过度表达在体外实验中显示对广谱化疗药物的耐药。因此急需发展一种高效低毒的方法来逆转P-gp介导的多药耐药，目前国内研究P-gp介导耐药的合适体外模型还很少，限制了多药耐药的研究。本部分的研究目的在于建立人卵巢癌多药耐药细胞亚株，为探讨卵巢癌细胞MDR的发生机制，探寻克服卵巢癌耐药的有效方法建立体外实验模型。 方法：亲代细胞OVCAR-3间断暴露于浓度呈梯度递增的阿霉素(Adriamycin，ADM)中进行逐步长期诱导培养(浓度梯度诱导法)，历经8个月，建立了卵巢癌ADM耐药细胞亚株OVCAR／AR。pHaMDR1是一个含有人MDR1基因cDNA的逆转录病毒载体，可以在被转染的细胞内稳定复制，并表达人MDR1基因，将pHaMDR1转染后的OVCAR-3细胞，置于浓度为100ng／mL的秋水仙碱中筛选，阳性克隆即多药耐药细胞亚株OVCAR／MDR。实时定量RT-PCR方法检测MDR1mRNA的表达；流式细胞术检测P-gp的表达；罗丹明123(Rhodamine123，Rh123)试验检测P-gp的药物转运功能；四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞对化疗药ADM、泰素(Taxol，TAX)和顺铂(Cisplatin，DDP)的抵抗性。