荞麦作为一种药食同源性作物，越来越受到人们的广泛关注。荞麦蛋白质有较为均衡的氨基酸组成。荞麦种子中包含有很多的药用成分，如，黄酮、类黄酮、植物甾醇、荞麦碱、硫胺素结合蛋白等，这些成分对于一些慢性疾病，如，糖尿病、高血压、高血脂和其他心、脑血管类的疾病有很好的预防和治疗作用。同时荞麦种子蛋白可以引起过敏反应，也极大地限制了荞麦的利用。近年来，日本，韩国的一些科学家对甜荞中的过敏成分进行了研究，分离得到了60-70 kDa，34-36 kDa,22 kDa，19 kDa，16 kDa，9 kDa等分子量不等的过敏蛋白，但对苦荞过敏成分的研究相对较少。我们之前以寿阳苦荞为原料，经分离纯化得到了一种分子量为24 kDa的过敏蛋白，通过免疫检测发现其为苦荞中主要过敏蛋白，并且采用基因克隆技术获得24 kDa过敏蛋白基因。在此基础上，进一步获得一种56 kDa蛋白的基因，并在Genebank登录。　　本实验根据种子中蛋白质的溶解性差异，采用缓冲液抽提，盐析，离子交换和凝胶柱纯化等步骤，得到了一种苦荞主要过敏蛋白，命名为TBt。运用分子排阻层析，Native-PAGE和SDS-PAGE对TBt的分子量及聚合状态进行了研究，发现TBt在天然条件下以三聚体的形式存在，每个单体又由二硫键连接的两个分子量为24 kDa和34 kDa的亚基组成。运用DTNB试剂测定了TBt中的巯基含量，TBt中游离巯基的含量为1.95 mol/g，总巯基含量为37.91 mol/g。表明在TBt中，绝大部分的半胱氨酸以二硫键的形式存在，而游离的巯基含量很少。通过计算确定每个TBt中有一对二硫键，而且主要为链间的二硫键。将纯化得到的TBt用β-巯基乙醇和碘乙酰胺处理后，得到了TBa和TBb两个片段。采用ELISA方法分别对TBt，TBa，TBb的免疫活性进行了分析，发现TBa和TBb的免疫活性高于TBt，这可能与TBt蛋白中的表位被相互覆盖等因素有关。　　荞麦过敏蛋白属于球蛋白类，是荞麦种子中较为丰富的一类储藏蛋白。本文通过荧光光谱技术，研究了VB1与苦荞麦过敏蛋白TBt的相互作用。发现VB1和TBt可形成复合物，两者结合后其结合常数k=2.42×105 L/mol,结合位点数n为2。运用计算出的热力学函数，初步确定他们之间的作用力主要为静电作用力;通过Native-PAGE分析显示，VB1与TBt作用的位点可能为TBt分子中的羧基。　　为了开发出一种简单、适用的荞麦食物过敏检测试剂，用于临床检测，我们将上述制备获得的TBt作为包被抗原，初步制备出荞麦过敏检测试剂盒。确定了用ELISA检测荞麦过敏原抗体时的几个重要步骤，其方法特异性和重复性都比较好。　　该论文研究内容为进一步开展荞麦过敏的机理研究及实际应用奠定了方法上的基础。