论文部分内容阅读
研究背景:女性恶性肿瘤中乳腺癌发病率位居第一位,并呈上升趋势,死亡率位居第二位,仅次于肺癌[1]。乳腺癌的发生是由于多种因素综合所导致,如环境因素,生活习惯,激素水平,遗传因素等,其中遗传因素作用显著。众多国内外研究表明与乳腺癌遗传因素最显著相关的是乳腺癌易感基因BRCA1和BRCA2。BRCA1和BRCA2是肿瘤抑制基因,可以发生多位点、多类型基因突变,造成编码蛋白功能改变,导致细胞基因修复功能缺失,从而引起患癌风险增加。NCCN降低风险指南指出BRCA1/2基因突变携带者患乳腺癌终身风险为56-84%,患卵巢癌风险为16.5-59%。针对BRCA1/2基因突变携带者进行干预治疗(生活方式改变、药物预防、手术干预)可以有效降低其乳腺癌和或卵巢癌发病风险。目前欧美乳腺癌BRCA1/2基因研究几近成熟,BRCA1/2突变检查已纳入乳腺癌NCCN指南、NCCN降低风险指南,指导家族性乳腺癌患者及家系成员的筛查、预防与治疗。但目前在中国家族性乳腺癌BRCA1/2基因规范化筛查仍是空白。中国目前存在的临床问题就是:中国人乳腺癌BRCA1/2基因突变位点与类型与欧美人种存在显著差异,国内研究普遍样本量小、检测方法各异,可能导致突变位点漏筛;BRCA1/2基因在中国健康家系成员中突变情况研究几近空白;国内BRCA1/2基因突变携带者的患癌风险和干预治疗更是急需开展。因此有必要研究与探讨中国人家族性乳腺癌BRCA1/2基因突变,将对降低乳腺癌发病风险,从而对降低乳腺癌发病率、死亡率产生重要意义。研究目的:家族性乳腺癌BRCA1/2基因突变检测,我国存在入组标准不一、检测方法不一、总样本量小等问题,尚不能完全揭示我国家族性乳腺癌BRCA1/2基因突变规律与特征;国内健康家系成员BRCA1/2基因突变携带者的检测与患癌风险研究接近空白。因此,我们采用PCR(聚合酶链反应)-DNA直接测序方法对家族性乳腺癌患者和家系成员进行BRCA1/2基因全编码外显子检测。目的旨在进一步补充中国家族性乳腺癌BRCA1/2基因突变库,并分析BRCA1/2基因突变与乳腺癌临床特征的相关性;同时开展国内健康家系成员BRCA1/2基因遗传筛查,为进一步临床随访及干预治疗奠定基础。研究方法:研究对象为家族性乳腺癌患者和家族性乳腺癌家系成员。入组标准:家族性乳腺癌患者组:1.病理学确诊为乳腺癌女性患者;2.其血亲(一级、二级、三级血亲)中至少有1人患乳腺癌和或卵巢癌。家族性乳腺癌家系成员组:1.无乳腺癌及其它恶性肿瘤病史女性;2.其血亲(一级、二级血亲)中存在家族性乳腺癌患者。共纳入家族性乳腺癌患者62例,家族性乳腺癌家系成员48例样本,均经过院伦理委员会批准,BRCA1/2基因检测知情同意后,抽取外周静脉血提取全基因组DNA,应用PCR(聚合酶链反应)-DNA直接测序方法检测BRCA1和BRCA2基因全编码外显子序列,检测结果与NCBI(美国国家生物技术信息中心)上BRCA1/2基因野生型c DNA序列(BRCA1(U14680.1)和BRCA2(U43746.1))比对,是否有BRCA1/2基因突变,并比较该突变是否导致编码蛋白改变。研究结果:1.BRCA1/2基因致病性突变位点62例家族性乳腺癌患者中发现7个BRCA1/2基因致病性突变位点,总突变率11.29%,其中BRCA1基因突变率8.06%;BRCA2基因突变率3.23%。BRCA1/2基因突变位点(BRCA1:1937ins C,3577del T,4538ins AG,4730ins G,5589del8;BRCA2:1382del A,2820del A)。48例家系成员检测发现3个BRCA1/2基因致病性突变位点,总突变率6.25%。BRCA1/2基因突变位点(BRCA1:1370ins A,3459ins A;BRCA2:6502ins T)。2.BRCA1/2基因潜在致病性突变位点62例家族性乳腺癌患者中发现3个BRCA1/2基因潜在致病性突变位点,基因突变导致编码氨基酸改变,但是否具有临床意义有待研究(BRCA1:1032T>G,4285G>A;BRCA2:8415G>T)。48例家系成员检测到9个BRCA1/2基因潜在致病性突变位点,均导致编码氨基酸改变,但是否具有临床意义有待研究(BRCA1:392T>G,1581A>G,4732A>C;BRCA2:1420C>G,3123G>A,3484A>G,7280C>G,8415G>T,9988A>C)。3.BRCA1/2基因多态性突变位点7个BRCA1/2基因同义突变,碱基突变不改变编码氨基酸,不具有临床意义(BRCA1:2201C>T,2430T>C,4427T>C;BRCA2:1593A>G,2457T>C,7470A>G,7683G>A)。4个BRCA1/2基因错义突变,碱基突变导致编码氨基酸改变,在乳腺癌信息库中均已证实不具有临床意义,与人群基因多样性有关(BRCA1:2731C>T,3232A>G,3667A>G,4956A>G)。4.家族性乳腺癌患者BRCA1/2基因突变率11.29%。其中早发性乳腺癌患者突变率33.33%(2/6);三阴性乳腺癌患者突变率为27.17%(3/11)。研究结论:1.检测中未发现国外报道的家族性乳腺癌BRCA1/2基因热点突变,未发现中国家族性乳腺癌“始祖突变”。可能与中国家族性乳腺癌BRCA1/2基因突变特征相关。2.中国家族性乳腺癌患者BRCA1/2基因致病性突变率显著低于国外报道,与中国家族性乳腺癌遗传背景有关。3.中国家族性乳腺癌患者中早发性乳腺癌、三阴性乳腺癌患者携带BRCA1/2基因致病性突变可能性更大。有家族史的早发性乳腺癌患者、三阴性乳腺癌患者应当引起重视。4.中国家族性乳腺癌家系成员中发现3例BRCA1/2基因致病性突变携带者,应引起重视。家系成员BRCA1/2基因突变率,发病风险有待进一步研究。