目的:通过体外培养人晶状体上皮细胞系HLE-B₃,以一定浓度过氧化氢（H₂O₂）诱导其发生凋亡,模拟年龄相关性白内障的发生机制,观察不同浓度雌二醇（E₂）对各组人晶状体上皮细胞增殖、凋亡的情况,及沉默信息调节因子1（SIRT₁）、P⁵³、乙酰化P⁵³(Ac-P⁵³)等表达的影响,以探讨E₂对H₂O₂诱导的HLE-B₃细胞氧化损伤的保护机制,以及SIRT₁/P⁵³通路在其中发挥的作用,为进一步了解E₂保护HLECs的机制提供新的思路。方法:1、体外培养人晶状体上皮细胞HLE-B₃,分别用不同浓度的H₂O₂(0μmol.L^-1,50μmol.L^-1,100μmol.L^-1,200μmol.L^-1,400μmol.L^-1)予以HLE-B₃作用不同时间（0h,1h,6h,12h,24h）,根据细胞计数盒8（CCK-8）和流式细胞学结果选择最佳浓度和合适时间。2、体外培养人晶状体上皮细胞HLE-B₃,分别用不同浓度的烟酰胺（NAM）(0μmol.L^-1,25μmol.L^-1,50μmol.L^-1,100μmol.L^-1,200μmol.L^-1)作用于正常培养的HLE-B₃,根据CCK-8结果选择NAM最佳作用浓度。3、将HLE-B₃随机分成5组:空白对照组,模型组（100μmol.L^-11 H₂O₂）,低浓度E₂组(100μmol L^-11 H₂O₂+0.01μmol.L^-1E₂),中浓度E₂组(100μmol.L^-1H₂O₂+0.1μmol.L^-1E₂),高浓度E₂组(100μmol.L^-11 H₂O₂+1μmol.L^-1E₂),采用CCK-8检测细胞增殖率,流式细胞学检测细胞凋亡率,观察不同浓度E₂对HLECs活力及凋亡率的影响,光学显微镜观察细胞生长状态,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测SIRT₁ mRNA、P⁵33 mRNA表达,Western-blot检测SIRT₁、P⁵³、乙酰化P⁵³(Ac-P⁵³)蛋白表达,共聚焦免疫荧光检测SIRT₁分布及荧光强度。4、将HLE-B₃随机分成3组,空白对照组,模型组（100μmol.L^-11 H₂O₂）,NAM组(100μmol.L^-11 H₂O₂+50μmol.L^-1NAM),观察各组HLECs细胞形态的变化,采用CCK-8、流式细胞学技术分别检测各组HLECs增殖、凋亡率,Western-blot检测Ac-P⁵³蛋白表达情况。统计学方法:运用SPSS19.0统计学软件对每组实验的数据进行统计分析,多组样本均数之间的比较采用单因素方差分析（ANOVA）,组间两两比较采用LSD-t检验,数据结果用?x±s表示,其中P<0.05认为差异具有统计学意义。结果:1、H₂O₂和NAM的最佳浓度选择:根据CCK-8和流式细胞学检测的结果,选择100μmol.L^-11 H₂O₂为诱导HLE-B₃细胞氧化损伤的最佳浓度,作用时间为12h;50μmol.L^-11 NAM是作用于HLE-B₃的最佳浓度,作用时间12h。2、CCK-8检测显示:低、中、高浓度E₂组的增殖率均高于模型组（均为P<0.05）,NAM组的细胞增殖率低于空白对照组、模型组（均为P<0.05）。3、流式细胞学检查显示:模型组细胞凋亡率高于其它各组（均为P<0.05）,组间凋亡率相比,空白对照组<高浓度E₂组<低浓度E₂组<模型组（均为P<0.05）,中、低浓度E₂组差异无统计学意义（P>0.05）;NAM组的细胞凋亡率较模型组高（P<0.05）。4、RT-qPCR结果显示:SIRT₁ mRNA表达随着E₂浓度的升高而增加,高浓度E₂组>中浓度E₂组>低浓度E₂组>模型组>空白对照组（均为P<0.05）;空白对照组中P⁵33 mRNA表达低于其它各组（均为P<0.05）,其余各组之间两两比较,差异均无统计学意义（均为P>0.05）。5、Western blot结果显示:SIRT₁蛋白表达量随着E₂浓度升高其表达依次增加（均为P<0.05）;而Ac-P⁵³在模型组的表达高于空白对照组和各浓度E₂组（均为P<0.05）,且低浓度E₂组>中浓度E₂组>高浓度E₂组（均为P<0.05）;空白对照组中P⁵³表达低于其它各组（均为P<0.05）,其余各组之间两两比较,差异均无统计学意义（P>0.05）;NAM组的Ac-P⁵³蛋白过表达,显著高于模型组、空白对照组（均为P<0.05）。6、共聚焦免疫荧光结果示:SIRT₁荧光强度在高浓度E₂组中最强,组间两两比较,高浓度E₂组>中浓度E₂组>模型组>空白对照组（均为P<0.05）,低浓度E₂组与模型组、中浓度E₂组差异无统计学意义（均为P>0.05）,SIRT₁主要定位于细胞核。结论:1、生理浓度下的E₂能降低HLE-B₃凋亡率,对HLECs具有保护作用。2、SIRT₁/P⁵³通路参与HLECs氧化损伤后的凋亡过程,并在其中发挥重要作用。3、E₂可能通过SIRT₁/P⁵³通路发挥对HLE-B₃的保护作用,其机制可能是:随着E₂浓度的增加,SIRT₁表达增强,Ac-P⁵³水平降低,HLE-B₃凋亡减少。