[目的]甲型肝炎病毒(HAV)是一种具有高度传染性的病原体,引起急性肝病。甲肝病毒感染后可诱导机体产生抗甲型肝炎病毒的结构蛋白和非结构蛋白的抗体。然而,甲型肝炎病毒疫苗的接种导致机体产生主要针对结构蛋白(病毒衣壳)的抗体。而非结构蛋白仅在活病毒活跃复制过程中大量产生,所以在疫苗接种的受试者中针对非结构蛋白的抗体没有或很少产生。目前,商业化免疫检测试剂不能区分人体内甲肝病毒抗体是来自天然感染或是疫苗免疫。在我们开展的甲型肝炎减毒活疫苗和灭活甲型肝炎疫苗的IV期临床试验中,鉴别受试者体内产生的甲肝抗体是来自疫苗免疫或是甲肝病毒天然感染是至关重要的。因此,基于非结构蛋白抗体产生在两种免疫形式中的差异,我们拟建立一种可以区分甲肝病毒天然感染与疫苗免疫的抗体ELISA检测方法。[方法]在我们的研究中,我们将甲型肝炎病毒非结构蛋白的免疫优势表位进行设计、合成、连接并克隆到pGEX-5X-1质粒。并将重组蛋白在大肠杆菌中表达,并经Ni2+磁珠纯化。然后用纯化的重组蛋白作为ELISA抗原,检测血清中HAV非结构蛋白的抗体。本研究构建的ELISA一共检测了来自疫苗Ⅳ其临床研究的77份减毒活疫苗受试者血清样本和89份灭活疫苗受试者血清样本,同时以16份天然感染的患者作为对照。[结果]疫苗接种样本和急性感染样本的OD450平均值分别为0.529(减毒组为0.486,灭活组为0.567)和1.187,独立样本T检验证实两者的差异是有意义的(P<0.05)。根据受试者工作特征(ROC)曲线,此ELISA的灵敏度和特异性分别为93.80%和91.00%。[结论]成功构建了一个能够区分甲肝病毒天然感染和疫苗免疫的具有高灵敏度和特异性的抗体ELISA检测方法。