肿瘤坏死因子-alpha（TNF-α）是一种重要的炎性细胞因子，主要由活化的巨噬细胞分泌，但很多肿瘤细胞也表达。TNF-α有两种存在形式，即跨膜型（tmTNF-α）和分泌型(sTNF-α)，二者在炎症或肿瘤中发挥截然不同的生物学效应。sTNF-α具有促炎作用，能诱导肿瘤细胞生长（低剂量或生理剂量）或坏死（高剂量）；而tmTNF-α具有抑炎作用，可诱导肿瘤细胞凋亡。介导tmTNF-α向sTNF-α转化的主要酶是TNF-α转化酶（TACE，又称为ADAM17）和MMP7，丝氨酸蛋白酶也被报道过有类似的作用。本室在前期工作中筛选到一种tmTNF-α特异性单克隆抗体，可作用于锚定在细胞膜上的tmTNF-α发挥抗肿瘤效应，杀伤肿瘤细胞、抑制肿瘤生长，而不与sTNF-α发生交叉反应。因此，该抗体有望成为临床上靶向杀伤高表达TNF-α肿瘤（如乳腺癌、白血病等）的生物药物。　　目前，该抗体本身的作用机制尚未明确，由于该抗体识别表位接近TACE作用位点，故推测该抗体可能通过空间位阻，竞争性阻断TACE或/和MMP7与tmTNF-α的结合，从而抑制sTNF-α分泌，促进tmTNF-α表达。为了对此作出验证，本课题组的前期工作已经证实了该抗体可以促进tmTNF-α表达，抑制sTNF-α分泌。本研究则利用分子克隆技术及蛋白纯化技术获得带有his标签的人MMP7全长和TACE突变体蛋白，然后用蛋白结合实验观察tmTNF-α抗体能否竞争性抑制tmTNF-α与TACE或MMP7的结合，从而阐明tmTNF-α抗体的作用机制，为开发该抗体的临床应用提供理论依据和实验证据。