骨骼肌的生长发育是一个高度协调的多步骤生物学过程,大量研究表明长链非编码RNA（long non-coding RNA,lnc RNA）为骨骼肌生长发育的重要调控因子。目前,肌肉发育相关lnc RNA的研究大多集中在人和小鼠上,针对牛肌肉发育相关lnc RNA的研究相对较少。因此,获得调控牛肌肉发育的lnc RNA并解析其作用机制有助于理解牛肌肉发育的过程,可以为牛分子育种提供新的靶点参考。1.本研究从前期不同胚胎发育阶段的肌肉组织lnc RNAs测序结果中筛选出1条肌肉高表达lnc RNA,鉴定其位于牛基因组23号染色体,命名为lnc23。q RT-PCR检测发现,随着肌卫星细胞的分化进程,lnc23表达呈先上升后下降的趋势,且在分化第2天（DM2）表达水平达到峰值。亚细胞定位表明lnc23位于细胞核,编码潜能预测与体外翻译实验表明lnc23不编码蛋白,为非编码RNA。2.利用si-ASO-lnc23和pc DNA-lnc23成功构建了牛骨骼肌卫星细胞lnc23抑制表达模型和过表达模型,通过q RT-PCR和Western blot检测细胞增殖与细胞分化标志基因的表达,同时采用Ed U细胞增殖实验和免疫荧光技术进一步检测lnc23对牛骨骼肌卫星细胞增殖与分化的影响。发现lnc23下调表达促进细胞增殖,抑制细胞成肌分化;lnc23上调表达对细胞增殖没有影响,但促进细胞成肌分化,表明lnc23对牛骨骼肌卫星细胞成肌分化具有正调控作用。3.采用TMT 10-plex标记的定量蛋白质组学技术分析抑制lnc23表达的牛肌卫星细胞和对照细胞的差异蛋白,在P≤0.05、cut-off为0.446的标准下,鉴定到312个差异表达蛋白。生物信息学分析发现这些差异蛋白显著富集于骨骼肌发育、肌动蛋白细胞骨架和细胞融合等成肌分化的关键过程,表明lnc23下调表达可能会减弱细胞间的信号传递和细胞融合过程进而抑制成肌分化,进一步说明lnc23对成肌分化具有正调控作用。4.采用RNA pulldown/LC-MS技术鉴定到140个lnc23潜在结合蛋白,生物信息学分析发现这些潜在结合蛋白显著富集于Arp2/3复合体介导的肌动蛋白成核和RNA结合等生物学过程,表明lnc23潜在结合蛋白可能参与成肌分化。进一步利用RIP技术验证lnc23与候选蛋白的结合,发现lnc23在PFN1免疫沉淀物中的富集度为阴性对照Ig G的31.4倍,证实PFN1为lnc23的一个结合蛋白。5.进一步采用q RT-PCR检测PFN1对成肌分化的作用,发现下调PFN1能够促进细胞分化标志基因Myo G和My HC的表达,说明PFN1对成肌分化可能存在负调控作用。通过Western blot初步发现PFN1下调后能够促进其互作蛋白Rho A和Rac1的表达,同时证实lnc23正调控Rho A和Rac1蛋白的表达。据此推测lnc23可能通过与PFN1结合减弱了PFN1对Rho A和Rac1的抑制作用,进而促进成肌分化。综上,本研究新发现了1条牛肌肉高表达lnc RNA—lnc23,证实lnc23能够促进牛骨骼肌卫星细胞的成肌分化,进一步确定PFN1为lnc23的结合蛋白,并初步揭示了lnc23-PFN1-Rho A/Rac1调控牛骨骼肌卫星细胞成肌分化的作用机制。