论文部分内容阅读
目的:课题组前期研究发现SPP1(Secretedphosphoprotein 1)基因在口腔鳞状上皮细胞癌(Oral squamous cell carcinoma,OSCC)中表达显著上调。SPP1基因的编码蛋白称为骨桥蛋白(Osteopontin,OPN),是一种趋化因子样分泌蛋白,在多种癌症的生长和转移中发挥着重要的作用。在OSCCs中,关于肿瘤间质是如何调控肿瘤细胞中OPN的表达,以及OPN是如何影响OSCC细胞生物学行为等问题,目前尚不明确。在本研究中,我们将检测SPP1在OSCC中的表达情况,研究OPN对OSCC细胞生物学行为的影响和作用机制,进一步分析肿瘤间质对肿瘤细胞中OPN表达的影响及调控机制,并初步分析SPP1的表达水平在OSCC患者预后评估中的价值。方法:运用免疫组化染色和实时荧光定量PCR技术,检测OPN/SPP1在OSCC组织中的表达水平,并分析SPP1 mRNA的表达水平与患者临床病理参数的相关性;采用小RNA干扰和质粒转染技术敲低或上调OSCC细胞中SPP1的表达,通过细胞增殖实验、集落形成实验以及transwell细胞迁移和侵袭实验,检测OPN对OSCC细胞生物学行为的影响;通过共培养技术观察和分析肿瘤相关成纤维细胞(Cancer associated fibroblasts,CAFs)调控 OSCC 细胞表达 OPN 的机制;运用免疫共沉淀实验分析OPN和整合素受体的结合;应用信号通路抗体芯片,分析OPN调控OSCC细胞生物学行为的主要机制;应用裸鼠皮下成瘤实验和实验性肺转移实验,评估OPN的促癌功能及靶向抑制OPN在治疗中的潜在价值。结果:SPP1基因在OSCC组织中高表达,其表达水平与肿瘤的大小、淋巴结转移、TNM分期以及患者的不良预后密切相关;免疫组化染色结果显示,OSCC中OPN的表达主要分布在肿瘤细胞中,且在癌巢进展前沿表达更高;与正常口腔黏膜细胞相比,OSCC细胞中SPP1/OPN的表达水平显著升高;而表达升高的OPN通过与OSCC细胞表面的整合素αvβ3结合,激活NF-κB信号通路,促进下游相关基因MMP2,MMP9,uPA和ICAM-1的转录,进而调控OSCC细胞的生长、侵袭和迁移等生物学行为;进一步研究发现,OSCC细胞中OPN表达的升高与肿瘤细胞和CAFs之间的相互作用有关;对其机制研究发现,CAFs分泌的IL-6参与调控OSCC细胞中OPN的表达,IL-6通过激活肿瘤细胞中STAT3的转录活性,进而促进细胞内OPN的表达;同时,CAFs分泌的IL-6可以通过OPN-αvβ3-NF-κB信号通路调控OSCC细胞的生物学行为;而更重要的是,同时抑制OPN和IL-6的功能可以显著抑制OSCC的生长和转移;此外,相对于单基因的预测效果,SPP1和II-6联合预测因子在OSCC的预后判断中具有更好的预测效能。结论:本研究发现并证实CAFs分泌的IL-6可以通过OPN-NF-κB信号通路调控OSCC细胞的生物学行为;结果表明SPP1和IL-6是OSCC预后预测和靶向治疗的候选分子靶点。