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目的1、分析阐述苏州大学附属第一医院急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)的临床特点及实验室特征。2、探讨T-ALL患者及本中心保存的8种T-ALL细胞株STAT5B基因突变。3、筛选针对STAT5B基因突变的靶向药物,初步阐述其作用机理。研究对象和方法1、研究对象:收集2006年1月至2014年7月在苏州大学附属第一医院初诊急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)的141例患者的临床及实验室资料。其中,男性116例,女性25例,男女性别比例为4.64:1;成年患者(>18岁)93例,儿童患者(≦18岁)48例,患者中位年龄为24岁。2、选取93例急性T淋巴细胞白血病患者及本中心保存的8种T-ALL细胞株,抽提RNA,并设计引物通过RT-PCR扩增STAT5B基因全长,所得RT-PCR产物采用第一代测序技术Sanger测序法分析STAT5B基因突变。3、以伴有STAT5B N642H位点基因突变的KOPT-K1细胞株为细胞模型,应用CCK8法分析初步筛选STAT5B N642H位点基因突变靶向药物。4、应用流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测候选药物第三代TKI Ponatinib处理KOPT-K1细胞后的凋亡及周期变化。结果急性T淋巴细胞白血病患者临床及实验室特征1、141例急性T淋巴细胞白血病患者,白细胞计数中位值为93×109/L,血红蛋白含量中位值为105g/L,血小板计数中位值为60×109/L,骨髓原始细胞比例中位值为83.5%。按照FAB分型标准,141例T-ALL患者中ALL-L1型40例,ALL-L2型46例,ALL未分类型(NOS)55例。三组患者临床基本信息统计分析发现,在初诊骨髓原幼细胞比例中位值方面,ALL-L1>ALL-L2>NOS(88%>84.5%>76%,P<0.05);在年龄、性别、中位白细胞计数、中位血红蛋白含量、中位血小板计数方面,三组之间无统计学差异。2、141例T-ALL患者中,98.6%(139/141)的患者染色体核型分析成功,染色体正常核型(NK)占58.3%(81/139),异常核型检出率为41.7%(58/139)。其中,单体核型(MK)占5.8%(8/139),t(11;14)(p13;q11)占5.0%(7/139),其它≥2次的结构性异常主要有6q-,del(6)(q21),i(7q),+8。3、83例T-ALL患者进行融合基因检测,20例患者可检测到基因异常。4例男性患者检测到SET-NUP214融合基因转录本,中位年龄为26(23-54)岁;8例患者检测到SIL-TAL1融合基因转录本,中位年龄为17.5(12-42)岁,男女性别比为7:1。其他检测到的融合基因有:SET-CAN(+)2例,BCR-ABL(+)1例,HOX11(+)1例,MLL-MLL(+)1例,MLL-AF10(+)1例,MLL-AF9(+)1例,TCR重排(+)1例。4、对117例T-ALL患者进行常见基因突变检测(PHF6、FBXW7、NOTCH1、WT1、LMO2),其中,NOTCH1突变最常见,发生率为47%(55/117),16例患者具有PHF6突变(13.7%),FBXW7、WT1、LMO2突变例数分别为12例(10.2%)、4例(3.4%)、3例(2.6%)。急性T淋巴细胞白血病患者及T-ALL细胞株中STAT5B基因突变研究Sanger测序结果显示93例T-ALL患者及8株T-ALL细胞株中只发现STAT5B N642H位点基因突变。其中,1例儿童患者伴有STAT5B p.N642H突变,8株T-ALL细胞株中KOPT-K1细胞株存在STAT5B N642H突变。STAT5B基因突变靶向药物筛选1、4种候选药物分析发现,酪氨酸激酶抑制剂(TKI)及STAT5B抑制剂AZD1480对KOPT-K1细胞均有抑制作用。其中,第3代TKI Ponatinib对其抑制作用最强,其抑制作用优于STAT5B抑制剂AZD1480。2、第3代TKI Ponatinib处理KOPT-K1细胞72h后,流式细胞周期检测发现G0/G1细胞比例明显高于未加药组(75.61±0.12%VS 58.88±4.07%,P<0.05)。结论1、本中心141例急性T淋巴细胞白血病患者中,异常染色体及再现性染色体异常检出率较低(41.7%),最常见的融合基因为SIL-TAL1,NOTCH1突变在T-ALL中发生率最高。2、成人T-ALL患者中STAT5B N642H位点突变罕见,儿童中STAT5B N642H突变发生率为3.6%,发现KOPT-K1细胞系存在STAT5B N642H位点基因突变,为研究STAT5B基因突变的药物提供理想的细胞模型。3、第三代TKI Ponatinib对KOPT-K1细胞的增殖有抑制作用,且KOPT-K1细胞对Ponatinib最为敏感,提示小分子药物Ponatinib在治疗STAT5B基因突变的血液病中可能具有临床应用价值。