对于遗传疾病的基因治疗，能够实现转基因的长期稳定表达、而不引起宿主免疫反应的转基因表达系统，是医疗界孜孜以求的目标。自1990年起，已有1996项基因治疗项目进入临床研究，在先天性黑内障、血友病等疾病的基因治疗中已取得重大突破。但由于基因治疗的临床研究中出现了不同程度的免疫反应，特别是细胞免疫毒性，基因治疗在临床研究中的广泛应用受到了限制。基因治疗药物引起细胞免疫毒性的具体原因尚无定论，目前还没有适当的应对策略。基于树突状细胞（DC）是机体功能最强的专职抗原递呈细胞（APC），本研究认为DC可能是引起基因治疗细胞免疫毒性的执行者。未成熟树突状细胞（iDC）具有极强的抗原摄取能力，一旦有抗原进入，立即被iDC摄取，iDC被激活并向迁移淋巴结迁移，迁移过程中即分化为成熟树突状细胞（mDC），mDC能够刺激T细胞分化为特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL），产生细胞免疫毒性。因此，本课题提出，特异性地减少mDC内转基因的表达，从而降低mDC对抗原的呈递，但又不影响转基因在其它正常细胞内的表达，可能是规避基因治疗药物因转基因产物所诱导的细胞免疫毒性的有效方法。MicroRNA（miRNA）是一类具有靶基因调控功能的非编码小RNA，在进化过程中高度保守，能与靶基因mRNA的3’非翻译区（3’UTR）进行特异性地碱基互补配对，促进其剪切、降解或抑制翻译，从而调控靶基因的表达。mDC特异性高表达miR155的特性，为我们构建可以特异性沉默mDC内转基因表达载体提供了条件。本课题将与miR155完全互补的结合序列（miR155T）串联插入到载体表达框的3’UTR中，构建了新型基因治疗载体，并利用非病毒载体及慢病毒载体验证了我们的学术假设。本研究首先通过新型基因治疗载体与miR155mimic的共转染实验，验证了miR155可以有效抑制新型基因治疗载体的转基因表达。DC从非成熟到成熟的转化过程中，内源性miR155表达逐渐上升，在转染新型重组载体后，转基因表达也逐渐降低，符合本研究预期。随后，我们以细胞免疫实验常用的强抗原蛋白卵白蛋白（OVA）为转基因产物，构建了含miR155T的新型重组慢病毒载体。经流式细胞术检测，在转导不同成熟度的DC后，转基因抗原OVA的抗原肽在mDC表面的呈递能够被有效抑制。不同成熟度的DC转导含miR155T的新型重组慢病毒载体转导后，与EdU标记的T细胞共培养，可明显降低对T细胞的激活能力。总之，miR155在mDC内的特异性高表达，可以有效抑制含miR155T的新型基因治疗载体在mDC内的转基因表达、抗原的递呈及其对T细胞的激活。而在正常细胞中，该新型载体的转基因表达基本不受影响。该新型载体的开发，为避免今后基因药物的临床研究中发生细胞免疫反应，提供了新的思路。