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丙型肝炎病毒（Hepatitis C Virus, HCV）经血传播后可引起急慢性肝炎甚至肝癌。HCV疫苗的研发对于HCV的防治至关重要，而目前还没有安全有效的抗HCV疫苗，但是部分HCV感染者能够自行清除病毒，所以HCV疫苗的研发充满希望和挑战。研究显示体液免疫反应强度，抗体中和能力以及特异性细胞免疫反应（CTL）水平是疫苗成功的关键因素，而病毒载体疫苗在上述方面具有一定优势。恒河猴与人类近缘，系统免疫反应接近人类，而相对于黑猩猩又更易获取，所以本课题在前期研究的基础上，大量制备了基于三种病毒载体的新型HCV疫苗对恒河猴进行了免疫试验。其中包括：基于复制缺陷的腺病毒5型载体HCV疫苗(rAd-HCV)，复制缺陷的痘苗病毒载体（天坛株）的HCV疫苗（rNTV-HCV），以及基于整合缺陷慢病毒的假病毒颗粒疫苗(HCVpp)，三种疫苗均以HCV1b包膜糖蛋白E1E2以及非结构蛋白NS3作为靶标抗原。采用四种不同的免疫组合：rAd-HCV+HCVpp+rNTV-HCV, HCVpp+rNTV-HCV, HCVpp+rAd-HCV,以及rNTV+rAd-HCV。每组选用4只恒河猴进行序贯联合免疫，另外采用含HBV CS1和SS1抗原基因的DNA以及痘病毒载体作为无关对照进行了实验。实验通过长期（76周）的观测取样，重点监测猴体内HCV特异性体液免疫与细胞免疫反应，同时检测抗体血清对HCV病毒的中和能力，以及多种免疫应答相关的细胞因子水平的变化，以评价基于病毒载体的新型HCV疫苗单独或组合免疫方案在非人灵长类动物的免疫效果，为选取进行临床应用的疫苗和免疫方案提供依据。我们的主要检测结果如下：1）单纯采用rAd-HCV疫苗免疫能在恒河猴体内诱导产生滴度范围在102.3-3.5的HCV E1特异性IgG抗体，抗E2及NS3抗体滴度较低。所得的免疫血清对HCV假病毒具有较明显的中和能力，其针对1a亚型HCV假病毒（简称1a）的中和率为36.6%，1b亚型HCV假病毒（简称1b）为48.7%。所诱导产生的抗原特异性细胞免疫反应较弱，仅有单一样本检测到针对E2肽池和NS3肽池的弱阳性反应。2） rNTV-HCV疫苗基础免疫即能使恒河猴产生明显的抗原特异性细胞与体液免疫应答。在初次免疫后，实验组动物的抗体滴度E1为103.35±0.39,E2为103.01±0.35，NS3为102.65-2.77，体液免疫诱导效果优于HCVpp基础免疫组。而且，rNTV-HCV免疫组血清的病毒中和能力在强度（1b56.7%）和中和谱(能中和1a，1b)上均优于HCVpp。同时，rNTV-HCV免疫使恒河猴产生了较强的抗原特异性细胞免疫应答（中位数597;311-1210SFC/Million PBMC）。可见rNTV-HCV具有较强的HCV特异性细胞与体液免疫应答双重诱导能力。3） HCVpp疫苗作为基础免疫抗原能诱导恒河猴产生较为明显的体液免疫应答。在进行两次接种后，采用HCVpp进行基础免疫的实验组猴血清中HCV特异性抗体滴度均出现增强：抗E1滴度值为102.34-2.55，抗E2滴度值为102.73-2.81，抗NS3滴度值为102.24-2.37。免疫血清具有良好的病毒中和能力（1b43.1%），但是细胞免疫检测无明显的阳性结果（异常反应除外）。与rNTV-HCV比较，HCVpp疫苗的免疫原性相对较弱。4）序贯联合免疫效果的比较：采用rAd-HCV+HCVpp免疫策略进行了接种后，其血清抗E1抗体滴度增强至103.8±0.12，而最终的抗E2和NS3滴度则无明显增加。血清的病毒中和能力有所增强，其针对1b的中和率提升了10%，但是交叉中和谱不变。细胞免疫应答方面，采用一针HCVpp加强免疫即对rAd-HCV基础免疫的恒河猴具有增强效果。采用HCVpp+rNTV-HCV和rAd+HCVpp+rNTV-HCV免疫策略后，与基础免疫结果相比，实验猴的血清抗体滴度和中和能力均未见有效增强，仅使两组的细胞免疫反应有所增强。其中rNTV-HCV疫苗的加强免疫能使已采用了rAd-HCV+HCVpp联合免疫策略的恒河猴ELISPOT反应点数上升至中位数324（范围：10-1518）SFC/Million PBMC，增强较为明显。采用HCVpp+rAd-HCV以及rNTV-HCV+rAd-HCV免疫策略的两组实验猴的抗体滴度与基础免疫后的检测结果相比均获得明显增加，分别提高至103.05±0.15和103.88±0.18，E2的抗体滴度升至102.77±0.35和103.48±0.22。并且各组免疫血清的病毒中和能力也获得增强，能有效中和1a，1b，5a三个型别的HCV假病毒。细胞免疫方面，rAd-HCV能增强本底较低的HCVpp基础免疫组的特异性T细胞反应；而对已获得有效激活的rNTV-HCV基础免疫组，rAd-HCV的加强免疫的增强效果更为明显。采用rNTV-HCV基础免疫的恒河猴能被rAd-HCV有效加强，其T细胞反应检测值为各组最高（中位数1545;范围：818-2210SFC/Million PBMC）。并且该免疫方案能使实验猴的Th1和Th2细胞因子均获得增强，其中Th1型细胞因子的增强更为明显。基于上述结果我们认为，对于恒河猴，单纯rAd-HCV和HCVpp疫苗均表现出明显的体液免疫诱导能力而细胞免疫应答较弱，仅rNTV-HCV表现出明显的细胞和体液免疫双重诱导能力。采用序贯联合免疫时，rNTV-HCV+rAd-HCV免疫方案的效果较其他免疫方案具有明显优势，十分适合进一步进行深入研究和开发。