两种不同来源卵黏蛋白O-及N-糖链的电喷雾电离质谱(ESI-MS)分析

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卵黏蛋白(ovomucin)是蛋清中高度糖基化修饰的蛋白质,其高黏性是维持新鲜鸡蛋胶体特性的重要因素,含量大约占卵清总蛋白的2-4%,具有重要的医学、营养学和保健方面的应用价值。卵黏蛋白功能的发挥与糖链结构密不可分。目前对卵黏蛋白的研究主要集中在蛋白部分,关于其糖链结构的信息很少,缺乏对卵黏蛋O-及N-糖链的系统分析,阻碍了卵黏蛋白构效关系的研究进展。本研究改进了Omana等人发展的两步提取法,分别从鸡蛋和鸭蛋中提取了鸡卵黏蛋白和鸭卵黏蛋白。采用了传统的Carlson还原性p-消除法和非还原性解离O-糖链同时标记1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)的解离方法释放鸡卵黏蛋白中的O-糖链;同时利用PNGase F解离其中的N-糖链。对纯化后的两种类型的糖链(N-/O-糖链)分别进行了ESI-MS和MS/MS分析。此外,为了探究不同种属卵黏蛋白糖链的表达差异,我们还分析了鸭卵黏蛋白中的O-及N-糖链。研究结论如下:1.经SDS-PAGE凝胶电泳检测,改进的两步法提取得到的鸡(鸭)卵黏蛋白纯度较高,基本不含有其它杂蛋白。2.ESI-MS结果表明,鸡卵黏蛋白中共检测到14种O-糖链:其中5种为中性糖链,9种为酸性糖链(其中3种糖链被唾液酸化修饰,3种糖链被硫酸化修饰,而其它3条同时被唾液酸化和硫酸化修饰);共检测到了27种N-糖链:22种为中性糖链,2种为硫酸化修饰糖链,2种唾液酸化修饰糖链,还有1种为同时唾液酸化和硫酸化修饰糖链。3.ESI-MS结果表明,鸭卵黏蛋白中检测到7种O-糖链:4种为中性糖链,2种为硫酸化糖链,1种为唾液酸化糖链;共检测到20种N-糖链:其中19种为中性糖链;1种为硫酸化的糖链。4.比较发现两种卵黏蛋白糖链的种类及组成存在一定的差异。鸡卵黏蛋白中检测到14种O-糖链,而鸭卵黏蛋白中仅检测到7种O-糖链,这7种O-糖链除N1A1外其他6种糖链均出现在鸡卵黏蛋白中。对于N-糖链,这两种不同来源卵黏蛋白表现出较高的同源性,大部分N-糖链基本相同;鸡卵黏蛋白中7种糖链包括H3N8、H4N8、A2H4N2、 H5N4S1、F1H5N4、A2H3N3S1、A1H4N3,在鸭卵黏蛋白中未检测到。本研究可为进一步研究卵黏蛋白的构效关系及种属差异提供理论依据。
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