植物在生长发育过程中经常受到环境因素的胁迫,严重影响植物的正常生长和发育过程。当植物遇到高温、干旱等逆境时,植物体内会产生大量的活性氧。而抗坏血酸过氧化物酶（APX）是清除活性氧的关键酶,对于保护叶绿体和其他细胞组分免受H₂O₂及其所产生的羟基自由基的破坏是必不可少的。当植物体内的活性氧积累时,能快速诱导APX表达,APX催化抗坏血酸与H₂O₂反应而使H₂O₂被分解。迄今尚未见到从苹果中克隆到抗坏血酸过氧化物酶基因全长的报道。本试验以皇家嘎拉苹果叶片为试材,克隆了抗坏血酸过氧化物酶基因cDNA全长并构建其植物表达载体,为进一步研究其作用机制以及通过遗传转化提高植物的抗胁迫能力奠定基础。主要研究结果如下:1.利用改进的SDS-热酚法得到了高质量的RNA,为后续试验的顺利进行奠定了基础。2.根据Genbank中已经登录的烟草、辣椒、龙眼和杨树APX基因序列的保守区设计并合成引物,通过RT-PCR扩增到一个中间片段,然后再运用3’-RACE和5’-RACE分别扩增到苹果APX cDNA的3’端和5’端序列,最后设计一对特异引物获得苹果APX基因cDNA全长。该序列全长992bp,包括1个最大的开放阅读框,编码250个氨基酸。同源性分析表明它与其他物种的APX基因均具有较高的同源性,表明已成功获得了皇家嘎拉苹果叶片APX基因cDNA全长（GenBank No. EF528482）。3.将APX基因cDNA全长定向插入到植物表达载体pCAMBIA+pSB166中,构建了含有APX基因全长cDNA的植物表达载体pCAMBIA+pSB166-APX,并将其转化农杆菌EHA105,为该基因的遗传转化奠定了基础。