论文部分内容阅读
目的通过检测单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction, UUO)所致的肾间质纤维化(renal tubulointerstitial fibrosis, RIF)大鼠肾脏组织转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1)和Smad3的表达,初步探讨TGF-β1/Smad3信号通路在RIF中的作用。方法48只雄性6周龄Wistar大鼠随机分为假手术组和UUO组,每组24只。UUO组大鼠麻醉后,背侧切口行左侧输尿管结扎术,假手术组大鼠同样条件下只探及肾包膜。分别于造模后第7、14、21、28天每组各处死6只大鼠,取其左侧肾脏。HE染色和Masson染色行肾脏病理学检查并计算RIF指数,应用免疫印迹(Western blot)和实时荧光定量-PCR(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction, RT-PCR)检测肾脏组织Smad3蛋白及其mRNA表达,免疫组织化学法检测肾脏组织TGF-β1、Ⅳ型胶原(collagen-Ⅳ, Col-Ⅳ)和纤维连接蛋白(fibronectin, FN)的蛋白表达。结果1.与假手术组大鼠相比较,UUO组大鼠各时间点:(1)病理学检查显示:弥漫性淋巴细胞、单核细胞浸润,肾小管上皮细胞萎缩,胶原纤维化形成, RIF指数显著增高(P<0.01),梗阻时间越长,RIF指数越高;(2)肾脏组织Smad3蛋白及其mRNA表达均显著增高(P<0.05),梗阻时间越长,表达水平越高;(3)肾脏组织TGF-β1、Col-Ⅳ和FN的蛋白表达均显著增高(P<0.05),梗阻时间越长,表达水平越高。2.相关性分析:(1)UUO组大鼠肾脏组织Smad3、TGF-β1蛋白表达与RIF指数均呈显著正相关( r = 0.520、0.727,P< 0. 01);(2)Col-Ⅳ和FN的蛋白表达与RIF指数均呈显著正相关(r= 0.794、0.786,P<0.01);(3) Smad3蛋白表达与TGF-β1、Col-Ⅳ和FN蛋白表达均呈显著正相关(r= 0.592、0.672、0.508,P<0.01)。结论UUO所致RIF大鼠肾脏组织TGF-β1及Smad3表达均显著增高,梗阻时间越长,表达水平越高,RIF程度越重。TGF-β1/Smad3信号通路可能参与了RIF的发生发展。目的探讨全反式维甲酸(all trans retinoic acid, ATRA)对RIF大鼠肾脏组织TGF-β1/Smad3信号通路的影响,并探讨其作用机制。方法雄性Wistar大鼠72只随机分成3组:假手术组、UUO组、ATRA干预组,每组均为24只。采用UUO方法制备RIF模型,各组于术后第7、14、21、28天分别处死6只大鼠,取其左侧肾脏。肾脏组织HE及Masson染色观察病理改变,计算RIF指数,免疫组织化学法检测肾脏组织TGF-β1、Col-Ⅳ和FN的蛋白表达,Western blot及荧光定量PCR分别检测Smad3蛋白及mRNA表达。结果与UUO组比较,ATRA组大鼠各时间点肾脏组织RIF指数、TGF-β1、Col-Ⅳ和FN蛋白表达均显著降低(P<0.05);肾脏组织Smad3的蛋白及其mRNA表达未见显著降低(P>0.05)。结论ATRA可能通过下调UUO大鼠肾脏组织TGF-β1的表达,减少Col-Ⅳ和FN积聚而起到减轻RIF的作用,但可能并非通过降低TGF-β1/Smad3信号通路中的下游蛋白Smad3表达量而减轻RIF。