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犬乳腺肿瘤是宠物临床常见的肿瘤疾病之一,其中恶性率约为50%,该病严重威胁着宠物犬的健康,降低其生活质量,研究犬乳腺肿瘤疾病具有一定的实用价值。细胞凋亡作为Ⅰ型程序性细胞亡的关键,与肿瘤的发生发展呈负调控,可被视为抗肿瘤的潜在有效靶点。在MAPKs级联反应中任何一个环节出现障碍都会引起细胞失控生长,导致肿瘤等疾病的发生,暗示MAPKs信号转导过程中的相关蛋白或调控因子都有可能是潜在治疗肿瘤靶点。芦荟苷内含有多种氨基酸和维生素等营养物质,现代药理学研究表明其具有抗炎、抗氧化、增强免疫力等功效。此外,芦荟苷已被证实能在人类的不同肿瘤细胞中减少细胞增殖和诱导细胞凋亡。因此,这些结果显示芦荟苷是一种治疗癌症的潜在药物,然而,芦荟苷对犬乳腺癌细胞的作用机制研究较少。方法:1.体内实验:采用小鼠乳腺癌4T1细胞,经皮下注射BALB/C小鼠第四乳房垫,建立移植瘤小鼠模型,随后将小鼠随机分为5组（芦荟苷0、10、20、30、40mg/kg）。通过芦荟苷腹腔注射治疗28天,其中每两天记录小鼠的体重和肿瘤体积。剥离移植瘤和瘤旁组织,一部分固定H＆E染色观察病理变化,另一部分Western blot检测肿瘤组织凋亡相关蛋白的表达情况。2.体外实验:实验所用细胞为CMT 1211＆CMT 7364,细胞生长至对数期后,均在6孔板上操作,分别标记为（芦荟苷0、10、20、40、80、160μM）。CCK-8检测细胞增殖活力,细胞划痕实验检测芦荟苷对细胞迁移能力的影响。Q-PCR检测凋亡基因Bax、Bcl-2和XIAP的m RNA水平。Western blotting检测迁移蛋白MMP-2、MMP-9、凋亡蛋白Bax、Bcl-2、Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP、ERK1/2、p-ERK1/2、JNK、p-JNK、p38、p-p38水平。流式细胞术检测细胞周期和凋亡变化。p-ERK1/2、p-JNK、p-p38在细胞中的位置通过细胞免疫荧光实验测定。结果:1.小鼠接种4T1细胞7d后,成瘤率100%。芦荟苷治疗28天后,治疗组的小鼠移植瘤体积显著低于生理盐水的对照组,且随芦荟苷治疗浓度增加,小鼠移植瘤体积显著降低。观察移植瘤组织病理切片发现,与生理盐水对照组相比,芦荟苷40mg/kg治疗组显示,坏死性淋巴细胞显著增多,核浓缩现象明显。肿瘤组织提取蛋白做Western blot发现抑凋亡蛋白Bcl-2表达显著降低,而促凋亡蛋白Cleaved Caspase 3、Bax、Cleaved PARP的表达趋势则相反。2.CCK-8结果显示随着芦荟苷治疗浓度的增加和作用时间的延长,小鼠乳腺肿瘤细胞活力均显著降低。与此同时,流式细胞术检测细胞周期发现,经芦荟苷中浓度治疗后,s期时细胞显著增多。细胞免疫荧光检测p-ERK1/2的表达,发现芦荟苷中浓度治疗组和ERK抑制剂Ravoxertimib组,细胞内活化的ERK1/2表达水平显著降低。细胞划痕实验表明,芦荟苷治疗浓度增加后,迁移能力降低。Q-PCR结果显示芦荟苷治疗组的抑凋亡因子Bcl-2的表达水平显著降低,促凋亡因子Bax、一系列凋亡蛋白因子XIAP的表达水平显著上升。Western blot检测迁移蛋白结果显示随着芦荟苷治疗浓度的增加,MMP-2表达量显著降低,MMP-9表达量变化不显著。流式细胞仪检测细胞凋亡发现,随着芦荟苷的治疗组浓度增加凋亡率显著升高。Western blot检测细胞凋亡蛋白发现与组织蛋白表达趋势一致,磷酸化JNK、p38的表达量显著降低,免疫荧光实验也表明芦荟苷抑制JNK、p38的磷酸化。结论:芦荟苷抑制MAPKs信号通路中ERK1/2的激活,将细胞阻滞于S期,抑制细胞增殖。通过抑制p38、JNK的磷酸化影响下游抑凋亡因子和促凋亡因子的表达,诱导Bax的积累,激活Cleaved Caspase-3等凋亡蛋白的表达诱导乳腺癌细胞凋亡,从而发挥抗癌作用。因此,芦荟苷有望成为抗犬乳腺肿瘤的新型中草药。