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背景:恶性黑色素瘤是最具侵袭性的皮肤恶性肿瘤,恶性程度高。我国每年新发恶性黑色素瘤病例约2万例,且初诊多为晚期。目前晚期恶性黑色素瘤的治疗方法主要是以达卡巴嗪为主的综合治疗,尽管近年来以PD-1、CTLA-4抗体为代表的免疫治疗有所进展,但其总体治疗效果仍然不佳。恶性黑色素瘤的防治必须针对其发病机制。端粒酶是一种逆转录酶,通过合成端粒的重复序列来维持端粒的长度,超过90%的肿瘤细胞表达高活性的端粒酶,其与恶性黑色素瘤的发生发展息息相关。自噬是细胞溶酶体依赖性的降解途径,在恶性黑色素瘤的发生发展中扮演着重要角色,并有抗凋亡和抵抗化疗药物的作用。探索不同药物的联合治疗模式是目前恶性黑色素瘤临床试验的可见趋势,但目前尚未有文献报道联合抑制两者来治疗恶性黑色素瘤。本研究针对端粒酶和自噬在恶性黑色素瘤发生发展中的作用,探讨联合抑制端粒酶和抑制自噬治疗恶性黑色素瘤的潜在可能性及机制。方法:1.使用端粒酶抑制剂BIBR1532作用于恶性黑色素瘤细胞A375,应用CCK-8法检测细胞活力,AnnexinⅤ/PI双染检测细胞凋亡情况,观察端粒酶抑制剂对恶性黑色素瘤细胞生存的影响;2.使用端粒酶抑制剂BIBR1532作用于恶性黑色素瘤细胞A375,应用Western Blot检测自噬相关LC3Ⅱ、p62蛋白的表达情况,应用自噬双标腺病毒转染恶性黑色素瘤细胞A375,检测自噬流的情况,研究端粒酶抑制剂对恶性黑色素瘤细胞自噬的激活作用;3.联合使用端粒酶抑制剂BIBR1532和自噬抑制剂CQ作用于恶性黑色素瘤细胞A375,应用CCK-8法检测细胞活力,AnnexinⅤ/PI双染检测细胞凋亡情况,JC-1染色检测线粒体膜电位变化,PI染色检测细胞周期情况,克隆形成实验检测细胞增殖能力,研究联合抑制端粒酶和自噬治疗恶性黑色素瘤的可能性。结果:1.端粒酶抑制剂BIBR1532(50umol/L)抑制恶性黑色素瘤细胞A375的生长,并诱导细胞凋亡;2.端粒酶抑制剂BIBR1532(50umol/L)诱导黑色素瘤细胞A375 LC3Ⅱ蛋白表达上调、p62蛋白表达下调,自噬双标腺病毒转染恶性黑色素瘤细胞A375显示端粒酶抑制剂BIBR1532(50umol/L)处理后自噬流明显增加;3.端粒酶抑制剂BIBR1532(50umol/L)联合自噬抑制剂CQ(20umol/L)明显促进恶性黑色素瘤细胞A375死亡,诱导细胞凋亡及线粒体膜电位破坏,将细胞周期阻滞于G2/M期,并能显著抑制其克隆形成。结论:端粒酶抑制剂对恶性黑色素瘤细胞的生存具有抑制作用并且能诱导恶性黑色素瘤细胞自噬的激活,抑制自噬能够提高恶性黑色素瘤细胞对端粒酶抑制剂的敏感性。