【摘 要】
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牛结核病主要是由牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)引起的一种人兽共患的慢性、消耗性传染病。牛结核病原菌可以感染人和多种动物,其中,牛是最易感的动物特别是奶牛。人类与
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牛结核病主要是由牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)引起的一种人兽共患的慢性、消耗性传染病。牛结核病原菌可以感染人和多种动物,其中,牛是最易感的动物特别是奶牛。人类与牛的关系较为密切,据调查10%以上的人结核病是由牛分枝杆菌引起的,因此牛分枝杆菌是人结核病的重要病原,所以掌握和应用高敏感、高准确率的牛结核检疫方法是防止患结核病牛的牛分枝杆菌感染人类的重要手段之一。本试验根据GenBank公布的牛分枝杆菌AF2122/97(检索号NC002945)株的Ag85B基因序列设计引物,以牛分枝杆菌ValleeⅢ基因组DNA为模板利用PCR方法扩增牛分枝杆菌Ag85B基因,把Ag85B基因克隆于pET-32a(+)原核表达载体上,经测序和EcoRⅠ和KpnⅠ双酶切鉴定,获得阳性重组质粒pET32-Ag85B,将阳性重组质粒pET32-Ag85B转化到BL21感受态细胞中用IPTG进行诱导表达,经SDS-PAGE和Western-Blot检测分析,表明蛋白成功表达,而且能够与牛结核阳性血清反应,经His.bind柱子纯化后获得纯度较高的Ag85B蛋白。同时本试验以纯化的Ag85B蛋白为包被抗原,初步建立Ag85B-ELISA,对其包被浓度、血清稀释度、封闭液、及底物作用时间等方面进行选择和优化,而且对Ag85B-ELISA与PPD-ELISA方法在符合性、敏感性和特异性方面进行比较,结果显示Ag85B-ELISA特异性高于PPD-ELISA,而PPD-ELISA的敏感性高于Ag85B-ELISA,由于实验动物较少二者的符合性差别不明显。
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