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目的本实验在课题组前期研究工作的基础上,基于缺血性中风气血相关及肾精脑髓相关理论,建立局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,应用新安王氏内科医家两种经验治法(益气活血通络法、补肾生髓法)及其代表性中药验方(益气活血通络方、补肾生髓方),对局灶性脑缺血再灌注模型大鼠进行干预,以脑缺血后血管再生及其SCF/C-kit信号调节通路为研究切入点,采用免疫组化二步法、Western blot检测方法,观察缺血侧皮质区血管再生情况和SCF、C-kit、CD34、VEGF和Ang-1指标变化,以探讨SCF/C-kit信号通路在脑缺血血管再生中的作用及两种中医治法对血管再生及其SCF/C-kit信号调节通路的影响及其作用机制,为两种中医治法及方药在临床上的合理应用提供实验依据。方法健康雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠72只,月龄4个月,体重280~320g。随机法将SD大鼠分为:假手术组、模型组、益气活血通络法组和补肾生髓法组,4组大鼠,每组各18只。采用改良线栓法建立MCAO/R大鼠右侧脑缺血模型,经神经缺损体征的评定,2分或3分者入选。心脏内灌流固定的脑组织,进行冠状切片,采用免疫组化Envision二步法检测各组大鼠缺血侧额顶叶皮质区CD34、VEGF、Ang-1蛋白表达的阳性面积和平均吸收光密度的变化。采用Western Blot法,检测大鼠局灶性脑缺血侧额顶叶皮质区SCF、C-kit蛋白表达变化。采用DP801形态学显微图像分析系统进行免疫组化图像分析,采用AIC.Alpha View系统进行Western Blot结果分析,统计并记录所有数据。采用SPSS18.0进行整理并分析,计量资料使用Mean±S进行表示,多组间多时间点均值比较采用重复测量方差分析进行比较,同个时间不同组间比较采用单因素方差分析;如总体间差别有统计学意义,采用LSD进行两两比较,同组不同时间点比较采用单变量重复测量方差分析进行比较,如果组间总体差别具有统计学意义,则采用Bonferroni(B)进行事后两两比较;假设检验水平设定为0.05。使用EXCEL2007软件进行统计图、表的制作。结果(1)两种中医治法对模型大鼠额顶叶皮质区CD34、Ang-1和VEGF蛋白表达的影响不同组别再灌注3d时3个蛋白表达的比较:经过方差分析4个组总体间比较差别有统计学意义(P<0.01),经两两比较,模型组阳性面积显著低于假手术组,益气活血通络法组、补肾生髓组阳性面积显著高于假手术组,益气活血通络法组和补肾生髓法组阳性面积显著高于模型组,益气活血通络法组显著高于补肾生髓法组,差别均具有统计学意义(P<0.01);不同组别再灌注7d时3个蛋白表达的比较:4个组比较差别总体有统计学意义(P<0.01),经两两比较,模型组阳性面积显著低于假手术组,益气活血通络法组、补肾生髓法组阳性面积显著高于假手术组,益气活血通络法组和补肾生髓法组阳性面积显著高于模型组,差别均有统计学意义(P<0.01),益气活血通络法组和补肾生髓法组无明显差异(P>0.05);不同组别再灌注14d时3个蛋白表达的比较:4个组比较,总体间差别有统计学意义(P<0.01),经两两比较,模型组阳性面积显著低于假手术组,益气活血通络法组、补肾生髓法组阳性面积显著高于假手术组,益气活血通络法组和补肾生髓法组阳性面积显著高于模型组,补肾生髓法组显著高于益气活血通络法组,差别均有统计学意义(P<0.01);对组内不同时间点3个蛋白在额顶叶皮质区阳性面积比较采用单变量重复测量方差分析,假手术组、模型组、益气活血通络法组、补肾生髓法组不同时间比较差别均无统计学意义(P>0.05),平均吸收光密度均无统计学意义(P>0.05)。(2)两种中医治法对模型大鼠额顶叶皮质区SCF和C-kit蛋白表达的影响在额顶叶皮质区,不同组别再灌注3d时SCF和C-kit表达的比较:经过方差分析4个组总体间比较差别有统计学意义(P<0.01),经两两比较,模型组显著低于假手术组,益气活血通络法组、补肾生髓法组显著高于假手术组,益气活血通络法组和补肾生髓法组显著高于模型组,益气活血通络法组显著高于补肾生髓法组,差别均具有统计学意义(P<0.01);不同组别再灌注7d时SCF和C-kit表达的比较:组间比较差别总体有统计学意义(P<0.01),经两两比较,模型组显著低于假手术组,益气活血通络法组、补肾生髓法组显著高于假手术组,益气活血通络法组和补肾生髓法组显著高于模型组,补肾生髓法组显著高于益气活血通络法组,差别均具有统计学意义(P<0.01);不同组别再灌注14d时SCF和C-kit表达的比较:组间比较,总体间差别有统计学意义(P<0.01),经两两比较,模型组显著低于假手术组,益气活血通络法组、补肾生髓法组显著高于假手术组,益气活血通络法组和补肾生髓法组显著高于模型组,补肾生髓法组显著高于益气活血通络法组,差别均具有统计学意义(P<0.01);对组内不同时间点SCF和C-kitt比较采用单变量重复测量方差分析,假手术组、模型组、益气活血通络法组、补肾生髓法组不同时间比较差别均无统计学意义(P>0.05)。结论两种治法可通过促进CD34、VEGF以及Ang-1蛋白的表达,从而调节SCF/C-kit信号通路,促进脑缺血后血管再生,有利于局灶性脑缺血再灌注后受损脑组织的损伤的修复。