随着自由基理论的发展和活性氧的进一步研究,“抗氧化”和“抗衰老”已经成为化妆品行业关注的热点。抗氧化肽具有安全稳定、易溶于水、易吸收、分子量小,同时具有清除自由基、螯合金属离子等优点,在化妆品领域有很大的开发潜力。羊胎盘中含有丰富的营养物质,是优质的蛋白质资源。我国羊资源丰富,但羊胎盘的加工利用率不到3%,羊胎盘下脚料作为羊胎盘提取水溶性活性肽的废弃物,蛋白质含量高,氨基酸组成丰富,可作为制备多肽的蛋白资源。为实现羊胎盘的高值化利用,本文以羊胎盘下脚料为原料,通过酶解法制备抗氧化肽、进一步分离纯化,并通过人体实验评价其在化妆品中的抗衰老性能。主要内容如下:(1)收集经组织匀浆、反复冻融和低温离心所得的羊胎盘下脚料,冷冻干燥后过60目筛网得到羊胎盘下脚料粉末,其蛋白含量为81.41%,多糖含量为16.84%。羊胎盘粉有一定的抗氧化能力,清除DPPH自由基、超氧阴离子自由基、羟基自由基的IC50分别为5.4 mg/mL、2.88 mg/mL和15.2 mg/mL。(2)以DPPH?清除率和水解度为考察指标,筛选出木瓜蛋白酶为酶解羊胎盘下脚料的最适蛋白酶。通过单因素试验以及响应面法优化了酶解羊胎盘下脚料的工艺参数,得到最佳酶解工艺为:pH 6.4、温度55℃、加酶量4900 U/g、底物质量浓度33 mg/mL、水解时间120 min,此时水解度为7.92%,制备得到的羊胎盘酶解肽SPHs在10 mg/mL下,DPPH?清除率(DRSA),超氧阴离子自由基清除率(SRSA)和羟基自由基清除率(HRSA)分别为92.15%、93.45%和48.88%。(3)采用DA201-C型大孔吸附树脂对SPHs进行除糖脱盐处理,50%乙醇溶液洗脱得到的产物SPH-I多糖去除率达到82.85%。SPH-I经过超滤、Sephadex G-10凝胶层析色谱、反相高效液相色谱RP-HPLC分离纯化,得到DRSA最高的组分S12-2。在浓度为50 ug/mL时DRSA达到32.52%。用MALDI-TOF-MS对S12-2组分进行结构鉴定和氨基酸序列测定,得到一种由六个氨基酸组成的新肽,序列为Glu-Pro-Val-Ser-His-Phe,相对分子量为678.6。(4)选用通过Sephadex G-10凝胶色谱分离得到的S12组分,评价其在化妆品中的抗衰老功效。配制含1%、2%、3%、4%和5%S12的护肤乳液和护肤霜,双盲测试,在60天内连续监测受试者角质层含水量、皮肤水分流失量(TEWL)和弹性的变化。结果表明,使用添加S12的润肤乳液60天后,角质层含水量增长了27,皮肤TEWL降低了12 g/m2h,弹性系数R升高了38%。感官测试结果表明,添加S12的眼霜的吸收性、滑爽感、柔软感和水润感均优于同含量的谷胱甘肽产品及空白产品。连续涂抹含S12的眼霜60天后,能明显淡化眼周的细纹。