谷胱甘肽是一种关键的非蛋白质硫醇化合物，广泛应用于食品和制药行业。本研究采用产物抑制作用弱的GshF酶催化酶法合成GSH的两步反应;引入PPK，催化价格低廉的多聚磷酸盐和ADP合成ATP，降低生产成本。将GshF和PPK构建到仿生载体上，实现了酶的重复利用，延长了酶的使用寿命。　　(1)构建了来自多杀巴斯德菌(Pasteurella multocida)、无乳链球菌（Streptococcus agalactiae）的GshF酶和来自球形红细菌(Rhodobacter sphaeroides)、谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)的PPK酶的重组表达载体。并实现了GshF和PPK酶的正确表达，表达量为4-5mg/mL。　　(2)对双酶法生产GSH体系的反应条件进行了优化，得到了一系列的最优反应条件:GshF(Sa)、PPK(Rs)、T(37℃)、pH值(9.0)、ATP初始添加量(5％)、PolyP浓度(P6∶Cys=1.5∶1)、GshF和PPK酶量比(1∶1)、氨基酸摩尔比例(3∶1∶3)。并且将GSH生产体系的底物浓度从30mM扩大到50mM。最优条件下生产GSH，GSH产量由8.76g/L提高到13g/L，对应转化率为86.36％;并且ATP的外源添加量仅为体系理论需求量的5％、节约了95％。　　(3)开创性地将来自无乳链球菌的GshF和来自球形红细菌的PPK与聚多巴胺(PDA)微胶囊支架组成仿生固定双酶催化体系。验证了固定后PPK酶的效果，优化了双酶的固定位置，并且该系统显示出更高的酶重复利用率。37℃、350rpm充氮气保护条件下，仿生固定双酶可重复使用十批并且转化率依然可以达到75.11％。　　该体系对辅因子再生、级联反应（循环反应）、保护多亚基酶活性提供了参考方案。