蓖麻是世界十大油料作物之一，具有较高的经济价值与市场地位，被广泛应用于化工、航空、航天、机械等多个领域。蓖麻籽中存在着毒性物质，限制了蓖麻的综合开发利用。蓖麻含有的毒性物质中，以蓖麻毒蛋白毒性最强，它由A、B两条链组成，其中A链为效应链。利用分子生物学技术，抑制蓖麻蛋白A链基因的表达，为培育蓖麻无毒转基因植株奠定基础，对蓖麻无毒品种培育、提高蓖麻饲用价值及拓宽蓖麻综合利用途径有重要意义。 1.根据基因Genebank中发布的RTA基因序列，分别设计4对特异性引物，在两端分别插入不同的酶切位点。降落PCR法扩增蓖麻毒蛋白A链基因，纯化RTA-S1，RTA-S2，RTA-AS1、RTA-AS2片段，连接克隆质粒pGEM T-easy，转化大肠杆菌JM109，经菌落PCR及质粒酶切鉴定正确的阳性克隆做序列测定。测序结果显示，得到的基因片段与源序列高度同源，同源性分别为94％、94％、98％、98％。 2.将序列分析正确的阳性克隆提取质粒，分别酶切回收RTA-S1、RTA-S2及质粒载体pBI-121大片段，采用一步法连接，成功构建RTA基因正向重复表达载体pBI-RTA-S1-S2；提取质粒成功导入到农杆菌LBA4404中： 3.采用相同方法构建RTA基因反向重复表达载体，并将其导入到农杆菌中。