日本七鳃鳗Lyn-like的克隆表达、抗体制备及相关免疫学研究

来源 :辽宁师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liongliong533
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Lyn是酪氨酸激酶Src家族成员之一,在细胞的生长、分化、迁移以及粘附等方面起到十分重要的作用。本研究首次在日本七鳃鳗中发现了Lyn的同源序列并对其进行基因克隆得到完整的开放阅读框(ORF),命名为Lyn-like。Lyn-like的ORF全长为1515bp,编码含有504个氨基酸残基的蛋白质。多重序列比对分析结果显示,Lyn-like和哺乳动物Lyn分子一样具有四个保守结构域(Src同源结构域4(SH4)、SH3、SH2、激酶结构域(PKC))和一个可变的独特结构域(UD)。尽管Lyn-like与哺乳动物的Lyn和Hck均有较高的序列相似性,但是在独特结构域中Lyn-like与Lyn的同源性高于Hck的同源性。利用从基因库中搜索出鱼类到哺乳类各个分类阶元动物的Lyn和Hck序列构建了系统进化树,结果表明Lyn和Hck主要分成两大聚类群,Lyn-like作为一个单分支被聚类到Lyn聚类群中。这些结果表明Lyn-like是Lyn而不是Hck的同源物。实时荧光定量PCR表明Lyn-like在mRNA的水平上主要在七鳃鳗免疫相关组织中表达,并且发现混合菌刺激后的单个核白细胞和髓样小体中Lyn-like的表达量显著上调,这与在蛋白水平上免疫印迹检测的结果一致。免疫荧光实验表明,Lyn-like蛋白作为一种胞质蛋白,在可变淋巴受体VLRB~+淋巴细胞亚群中表达。以上生物学功能实验结果表明,Lyn-like可能在七鳃鳗的VLRB~+介导的适应性免疫应答中发挥着重要作用。
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