目的建立一种体外无血清培养扩增人骨髓间充质干细胞的方法,为骨组织工程研究提供种子细胞。方法从5例手术病人骨髓中分离制备单个核细胞悬液,分别接种于有血清培养基及自制的无血清培养基中,比较两种培养条件下细胞生长情况,流式细胞仪分析两种培养条件下间充质干细胞表面CD分子表达情况及细胞周期。结果有血清培养2～3天后细胞开始出现贴壁生长,1周左右有细胞丛生长,12～14天细胞融合成片,呈典型的旋涡状排列。无血清培养4～5天后细胞开始出现贴壁生长,8～10天左右有细胞丛生长,16～20天细胞融合成片。单层融合的MSCs消化传代培养,有血清培养1周左右达融合,无血清培养9～10天左右达融合,可继续传代扩增。流式细胞仪检测显示,两种培养条件下扩增后的人骨髓MSCs均不表达CD14,CD34和CD45,而强表达CD29、CD54、CD105;无血清培养组G₀/G₁期细胞比例明显高于有血清培养组（P＜0.05）。结论1.利用自行配制的无血清培养基能较好地培养、扩增人骨髓MSCs。2.无血清培养组G₀/G₁期细胞比例明显高于有血清培养组,说明与有血清培养相比,无血清培养的细胞其干细胞特性保存更好。