解除反馈抑制1,3-丙二醇发酵工艺的研究

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本论文主要研究了克雷伯氏肺炎杆菌解除反馈抑制发酵生产13-丙二醇的工艺。   对1,3-PD对菌体生长抑制的情况进行了研究,研究发现60g/L的1,3-PD对菌体生长有一定的抑制作用。以此为据,研究了补加不同浓度甘油对发酵过程的影响,发现补加低浓度的甘油会造成中期相对较低的菌浓和1,3-PD浓度,但是却可以使后期菌体的活力维持在比较高的水平,最终和补加高浓度甘油1,3-PD浓度达到同一水平,且有更高的转化率。   在此基础上建立了物理诱变(紫外和微波)结合摇瓶传代连续富集培养的方法高效筛选高产1,3-PD的菌株。摇瓶传代连续富集培养的步骤为:   Ⅰ摇瓶连续富集培养:筛选出菌浓数据属于第三类的摇瓶;   Ⅱ平板复筛:第三类摇瓶涂布平板挑选菌落长出时间比较早的菌落;   Ⅲ摇瓶复筛:平板筛选出的菌落进行摇瓶复筛,生长速率快的摇瓶菌种进行上罐实验。   最终筛选出四株高产1,3-PD的菌株,这四株菌株在补料分批发酵中在1,3-PD最终浓度、甘油得率和最高菌浓方面都有不同程度的提高。   为了分析高产菌株高产的机理,从代谢流角度对一株高产菌株和出发菌株进行甘油代谢流的对比分析,发现其甘油代谢流有很大差异,认为高产菌株是通过减少乳酸代谢途径的流量,进而提高2,3-丁二醇途径的流量,生成更多的NADH2用于1,3-PD的生成,达到提高1,3-PD代谢途径的流量和产量的结果。
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