柑橘Vc合成相关酶和ERF基因的克隆与表达分析

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维生素C (Vitamin C, Vc)是生物体中重要的抗氧化剂及辅酶因子,是人体健康和植物的生长发育中必不可少的物质;ERF(Ethylene-responsive element binding factor)是植物特有的一类转录因子,在参与植物的生长发育及调控抗逆境胁迫应答中具有重要作用。本研究以‘鄂柑二号’(C. unshiu Marc. cv. Egan No.2)果肉为材料,克隆了柑橘Vc合成的五个相关基因及ERF基因;并分别测定了果实生长发育过程及环剥处理后果肉中Vc的含量及合成相关的基因表达变化,以及环剥后果肉中ERF基因的表达变化。主要研究结果如下:1.从柑橘果肉中克隆得到了五个Vc合成相关的基因及ERF基因的cDNA全长:GDP-甘露糖焦磷酸化酶基因(CitGMP),该基因包含1086 bp的ORF,编码361个氨基酸,登录号为HQ224946;GDP-甘露糖-3’,5’-差向异构酶基因(CitGME),包含1134bp的ORF,编码377个氨基酸,登录号为HQ224947;磷酸二酯酶基因(CitGGP),登录号为HQ224948,包含1368bp的ORF,编码455个氨基酸;.L-半乳糖-1-磷酸磷酸酶基因(CitGPP),,包含813bp的ORF,编码270个氨基酸,登录号为HQ224949;L-半乳糖脱氢酶基因(CitGDH),登录号为HQ224950,包含954 bp的ORF,编码317个氨基酸;柑橘乙烯反应元件结合因子(CitERF) cDNA全长874bp, ORF编码207个氨基酸,登录号为HM064500。这些基因的氨基酸序列与其他植物的同一基因同源性较高,且具有各自相对保守的功能结构域。2.随着果实的生长发育,纽荷尔果肉中的Vc含量逐渐上升,且基因表达结果显示纽荷尔中CitGME、CitGGP、CitGDH及CitGLDH表达总体呈现上升趋势,与鄂柑二号相比具有较高的转录活性,这与两个品种间Vc的含量及变化趋势一致,橙类果肉具有较高的Vc水平可能是由于橙类具有更强的Vc合成能力。3.对成熟期的温州蜜柑进行了不同形式的环剥处理,结果表明,大枝环剥(BG)可提高果肉中Vc的含量,CitGME、CitGGP、CitGDH及CitGLDH的转录水平也显著上升;而结果枝环剥(FGD)后Vc含量降低,CitGDH和CitGLDH基因表达也明显下调,说明这些基因可能是柑橘Vc合成中的关键基因。4.BG处理后柑橘果肉中CitERF的表达呈持续上升趋势,FDG处理后其表达先下降后上升,与环剥后TSS的变化趋势一致,说明CitERF的表达可能受果实成熟过程中糖分积累的诱导。
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