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背景 端粒酶(Telomerase)是一种核糖核蛋白，具有维护染色体末端结构的功能；在细胞老化、癌变和永生化中具有重要的潜在作用。其中人类端粒酶的逆转录酶(hTERT)在大约85-95％的人体肿瘤组织表达，是肿瘤的一个重要标志，检测hTERT蛋白的表达情况在肿瘤的诊断和预后方面具有重要作用。 目的 制备人类端粒酶的逆转录酶(hTERT)抗体并探索其在肿瘤检测和研究中的应用。 方法 (1)利用pET原核表达载体构建表达了hTERT特异性的T基序区和hTERT C区的重组蛋白，IPTG诱导重组蛋白表达，大量提取并纯化重组蛋白包涵体；(2)应用纯化的重组蛋白包涵体免疫家兔制备抗hTERT的抗体，同时留取免疫前血清做为阴性对照；(3)将纯化的重组蛋白通过Western Blot检测抗体产生情况并确定抗体滴度；(4)应用制备的抗体通过Western Blot、免疫组织化学法检测肿瘤和肿瘤细胞系细胞中端粒酶的表达情况。 结果 (1)hTERT T基序区和C区重组蛋白在大肠杆菌中主要以包涵体形式存在，(2)以经过纯化的hTERT T基序区和C区两种重组蛋白包涵体为抗原免疫家兔，经过检测证实得到了含有抗hTERT抗体的抗血清；(3)Western Blot检测不同家兔产生抗体滴度，在1：10000—1：20000之间；(4)对肺腺癌和乳腺癌组织病理切片的免疫组织化学检测显示癌细胞的细胞核与细胞浆均有着色，而癌周细胞不着色；(5)肿瘤细胞系细胞裂解物的Western Blot检测发现有相对分子量≈60KD的特异条带。 结论 通过构建原核表达载体获得的hTERT抗原多肽，免疫 天津医科大学硕士研究生学位论文—— 动物成功制备出抗hTERT抗体，初步研究证明可以此抗体用于肿 瘤细胞系及肿瘤组织中的hTERT表达的检测，为进一步研究hTERT 抗体在肿瘤诊断中的价值打下了基础。