基于记忆性T细胞探讨针刺足三里的免疫调节机制

来源 :湖北中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:leoncici617
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目的免疫调节是指免疫系统中的免疫细胞和免疫分子之间,以及与其它系统之间的相互作用,使得免疫应答以最恰当的形式使机体维持在最适当的水平。但现有的对免疫调节的研究主要着重于效应性T细胞,而对记忆性T细胞的研究较少;本研究借助Ⅳ型超敏反应模型,探讨足三里电针预处理对记忆性T细胞的调节作用。方法1.观察足三里电针预处理对正常小鼠记忆性T细胞的影响。将32只体重为18-22g的SPF级C57BL/6雄性小鼠适应性喂养一周后,随机分为正常对照组(Con)、电针3天组(EA-3)、电针7天组(EA-7d)、电针14天组(EA-14d),每组8只。电针组小鼠行双侧“足三里”电针刺激,每日一次,每次30 min;电针强度为:疏密波,频率2/100 HZ,0.3 m A,5 min;0.5 m A,5 min;1.0 m A,20 min;按组别分别电针不同天数(3d、7d、14d);正常对照组除同时鼠衣固定外不进行其他操作。(1)体液免疫指标检测:电针处理后,分别取各组小鼠外周血血清,ELISA法检测血清中Ig M、Ig G、Ig G1、Ig G2a、Ig G2b、Ig G3等免疫球蛋白的含量;(2)细胞免疫指标检测:电针处理后,分离各组小鼠脾脏单个核细胞,流式细胞术检测脾脏组织CD3+T、CD4+T、CD8+T、CD4+Teff(Th1、Th2)、CD8+Tc、CD4+/CD8+Tm(Tn、Tcm、Tem)细胞数量。2.观察足三里电针预处理对Ⅳ型超敏反应(ACD)模型小鼠记忆性T细胞数量及免疫调节的影响。将45只体重为18-22g的SPF级C57BL/6雄性小鼠适应性喂养一周后,随机分为正常对照组(Con)、ACD模型组(M)、电针预处理+模型组(EA+M),每组15只。根据实验一中的结果确定电针预处理天数为7天。电针预处理+模型组:小鼠先电针双侧“足三里”7天,方法同实验一;然后用2,4-二硝基氟苯刺激诱导ACD模型;模型组:小鼠在实验前7天同一时间进行鼠衣固定,然后诱导ACD模型;正常对照组:仅在实验前7天同一时间鼠衣固定小鼠。(1)形态学观察:造模完成后24h取材,HE染色观察耳片厚度及炎性细胞浸润,初步评价足三里电针预处理的抗炎效应;(2)体液免疫指标检测:造模完成后24h,获取小鼠外周血血清,ELISA法检测血清中Ig M、Ig G、Ig G1、Ig G2a、Ig G2b、Ig G3等免疫球蛋白的含量;(3)细胞免疫指标检测:造模完成后24h,分离各组小鼠脾脏单个核细胞,流式细胞术检测脾脏组织CD3+T、CD4+T、CD8+T、CD4+Teff(Th1、Th2)、CD8+Tc、CD4+/CD8+Tm(Tn、Tcm、Tem)细胞数量。结果1.足三里电针预处理对正常小鼠记忆性T细胞的影响(1)足三里电针预处理7天可提高正常小鼠外周血血清中Ig G、Ig G2a免疫球蛋白的含量。与正常对照组相比,足三里电针预处理7天组小鼠血清中Ig G、Ig G2a免疫球蛋白含量升高,差异具有统计学意义,P<0.05。对其它免疫球蛋白(Ig M、Ig G1、Ig G2b、Ig G3)无明显影响,差异无统计学意义,P>0.05。(2)足三里电针预处理7天可增加正常小鼠脾脏组织CD3+T细胞数量,差异具有统计学意义,P<0.05;对CD4+T细胞、CD8+T细胞数量无明显影响。(3)足三里电针预处理7天可增强正常小鼠脾脏组织CD8+Tc细胞的功能。与正常对照组相比,足三里电针预处理7天组小鼠CD8+Perforin+细胞数量明显增加,差异具有统计学意义,P<0.01。(4)足三里电针预处理7天可影响正常小鼠脾脏组织CD4+T和CD8+T记忆性T细胞的数量。与正常对照组相比,足三里电针预处理7天组小鼠CD4+/CD8+Tn(CD3+CD4+CD44lowCD62Lhigh、CD3+CD8+CD44lowCD62Lhigh)细胞数量明显减少,差异具有统计学意义,P<0.05;而CD4+/CD8+Tcm(CD3+CD4+CD44highCD62Lhigh、CD3+CD8+CD44highCD62Lhigh)和CD4+/CD8+Tem(CD3+CD4+CD44low-highCD62Llow、CD3+CD8+CD44low-highCD62Llow)细胞数量明显增多,差异具有统计学意义,P<0.05,P<0.001。2.足三里电针预处理对Ⅳ型超敏反应(ACD)模型小鼠记忆性T细胞数量及免疫调节的影响。(1)足三里电针预处理可降低Ⅳ型超敏反应(ACD)模型小鼠外周血血清Ig G2a免疫球蛋白含量。与ACD模型组相比,足三里电针预处理7天组小鼠外周血血清Ig G2a含量明显下降,差异具有统计学意义,P<0.05。(2)足三里电针预处理可减少Ⅳ型超敏反应(ACD)模型小鼠耳片炎性细胞浸润,降低耳片肿胀厚度。(3)足三里电针预处理可减少Ⅳ型超敏反应(ACD)模型小鼠脾脏组织CD4+IFN-γ+、CD8+Perforin+细胞数量,发挥抗炎效应。与正常对照组相比,ACD模型组小鼠脾脏组织CD4+IFN-γ+和CD8+Perforin+细胞数量增加,差异具有统计学意义,P<0.05,P<0.01;与ACD模型组相比,足三里电针预处理组小鼠脾脏组织CD4+IFN-γ+和CD8+Perforin+细胞数量减少,差异具有统计学意义,P<0.05。(4)足三里电针预处理可影响Ⅳ型超敏反应(ACD)模型小鼠脾脏组织CD8+T记忆性T细胞的数量。与ACD模型组相比,足三里电针预处理组小鼠CD8+Tn和CD8+Tcm细胞数量增多,差异具有统计学意义,P<0.05;CD8+Tem细胞数量减少,差异具有统计学意义,P<0.05。结论足三里电针预处理对不同机能状态下的小鼠脾脏组织记忆性T细胞的调节作用以及免疫功能的影响不同。足三里电针预处理7天后,可促进正常小鼠脾脏组织CD4+/CD8+T细胞Tn向Tem、Tcm分化,增加Tem、Tcm数量,发挥对Tem、Tcm细胞的调节作用;足三里电针预处理可减少ACD模型小鼠CD4+Th1、CD8+Tc细胞数量,促进CD8+Tn细胞向CD8+Tcm细胞转化,减少CD8+Tem细胞的数量,重建ACD免疫稳态。
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