斑马鱼CD4<'+>CD8<'+>T细胞的鉴定及其参与ISKNV感染免疫应答的研究

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哺乳动物T细胞根据其表面表达CD4或CD8划分为辅助性T细胞(Th细胞)和杀伤性T细胞(Tc细胞)。Tc细胞表面CD8分子结合抗原-MHCⅠ分子复合物,能够杀伤表达抗原的靶细胞;Th细胞表面CD4分子结合抗原-MHCⅡ分子复合物,主要引起炎症反应和体液免疫。   本文通过生物信息学方法对斑马鱼CD4、CD8α和CD8β进行分析和预测,三者氨基酸序列具有保守的半胱氨酸,蛋白预测结构与人相似。基于生物信息学预测结果,选择蛋白胞外区抗原性好的肽段制备斑马鱼多克隆兔抗CD4、多克隆鼠抗CD8α和CD8β,并进行纯化,通过间接免疫荧光(IFA)和免疫印迹证实自制抗体能够与相应蛋白特异性结合。分别用兔抗CD4/鼠抗CD8α、兔抗CD4/鼠抗CD8β做双抗IFA检测斑马鱼外周血淋巴细胞,结果显示部分CD4+细胞可以表达CD8α和CD8β,鉴定了CD4+CD8+T细胞。   用斑马鱼感染ISKNV不同时期的外周血做双抗IFA(兔抗CD4和鼠抗CD8α),结果显示斑马鱼CD4+CD8+T细胞在感染ISKNV第一周数量增多,到感染约8天达到顶峰,10天后数量减少。据此推测斑马鱼CD4+CD8+细胞的功能与哺乳动物CD8+T细胞相似,参与细胞免疫应答经历活化和增殖、发挥免疫作用、记忆的过程。CD4发生表达量增多的现象早于CD8,可能对CD4+CD8+T细胞活化和功能发挥有辅助作用。本文首次鉴定了斑马鱼外周血中CD4+CD8+T细胞,并对CD4+CD8+T细胞参与ISKNV感染免疫应答进行了功能研究。
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