【摘 要】
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目的:将LIF基因在体外转染转染于骨髓间充质干细胞,转染成功后通过测试,以确定LIF能否在转染后的骨髓间充质干细胞中稳定表达,以促进周围神经再生,减少疤痕。方法:(1)大鼠骨髓间充质
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目的:将LIF基因在体外转染转染于骨髓间充质干细胞,转染成功后通过测试,以确定LIF能否在转染后的骨髓间充质干细胞中稳定表达,以促进周围神经再生,减少疤痕。方法:(1)大鼠骨髓间充质干细胞分离提取,原代培养及表型鉴定,采用密度梯度离心法联合贴壁法体外分离、培养大鼠骨髓间充质干细胞,在倒置相差显微镜下观察其形态并绘制其生长曲线,用流式细胞仪测定表面标记对骨髓间充质干细胞进行鉴定。(2)LIF慢病毒载体的构建、包装。(3)LIF慢病毒载体在骨髓间充质干细胞中转染,用ELISA检测LIF基因及蛋白表达水平。结果:(1)骨髓间充质干细胞成功的从一周龄大鼠骨髓血内分离出,其镜下表现为成纤维细胞样生长,可以向成脂、成骨细胞转化,通过流式细胞仪检测,其表面标记物CD44,CD90表达均为阳性,而CD34,CD45表达全部为阴性;(3)通过ELISA法进行了蛋白鉴定,目的基因大鼠LIF在骨髓间充质干细胞中得到了稳定表达。结论: LIF基因片段通过脂质体与慢病毒载体相连,将其转染于体外培养的骨髓间充质干细胞,发现LIF基因可以在骨髓间充质干细胞内得到持续、稳定的表达。研究证明LIF对损伤神经损伤修复有重要作用,特别是对轴突的生长有极大的促进作用。LIF慢病毒载体构建成功,LIF在局部持续、稳定的表达,为神经损伤的修复开辟了新途径,为进行下一步动物试验奠定了基础。
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