背景：乳腺癌是严重影响广大妇女身体健康的恶性肿瘤,主要是由乳腺导管上皮细胞发生的恶性细胞增殖。近年来,蛋白酶体通路在恶性肿瘤治疗中的作用受到越来越多的关注。泛素-蛋白酶体途径能够选择性地降解细胞内某些具有生物活性的蛋白质,特别是细胞周期相关蛋白,从而调节细胞的代谢、分化和增殖等生理过程；选择性降解癌基因及抑癌基因的产物、激活物或抑制物、凋亡调控蛋白等,达到调控细胞突变和肿瘤发生、转移的目的。硼替佐米(Bortezomib, Velcade)作为第一个蛋白酶体抑制剂药物,对多种肿瘤细胞有很强的抑制作用,现已用于治疗耐药的多发性骨髓瘤患者；并且越来越多的临床试验证明硼替佐米对其他多种恶性肿瘤具有治疗作用。目的：研究蛋白酶体抑制剂硼替佐米单药及与表阿霉素联合应用对于乳腺癌细胞生物学行为的影响,探讨其对乳腺癌细胞生长增殖的抑制作用及特点,观察硼替佐米单药及与表阿霉素联合应用对乳腺癌细胞周期和细胞凋亡的作用,以及乳腺癌侵袭和转移相关基因表达水平的影响,探讨硼替佐米对乳腺癌细胞抑制作用的可能机制。方法：本实验分为实验组和对照组。采用含10%小牛血清的RPMI-1640培养基培养MCF-7乳腺癌细胞,实验组分别加入终浓度为0.05、0.25、0.50、1.00、5.00μg/mL的表阿霉素(设为A1、B1、C1、D1、E1组),终浓度为0.01、0.10、1.00、5.00、10.00μg/mL的硼替佐米(设为A2、B2、C2、D2、E2组),以及硼替佐米与表阿霉素各浓度的组合(表阿霉素0.05μg/mL+硼替佐米0.01、0.10、1.00、5.00、10.00μg/mL,设为A1A2、A1B2、A1C2、A1D2、A1E2组；其余各组同前,分别为：B1A2、B1B2、B1C2、B1D2、B1E2组;C1A2、C1B2、C1C2、C1D2、C1E2组;D1A2、D1B2、D1C2、D1D2、D1E2组；E1A2、E1B2、E1C2、 E1D2、E1E2组,共25组),分别培养24h,48h及72h,MTT法测细胞生长抑制率。选择药物浓度为0.10μg/mL硼替佐米+0.50μg/mL表阿霉素、0.10μg/mL硼替佐米+0.25μg/mL表阿霉素联合以及相同浓度的表阿霉素、硼替佐米单药培养MCF-7细胞不同时间(24h、48h和72h),碘化丙啶(PI)染色法应用流式细胞仪测细胞周期变化；AnnexinV-PI双染方法应用流式细胞仪检测细胞凋亡。选择药物浓度为0.10μg/mL硼替佐米+0.50μg/mL表阿霉素、以及单药培养MCF-7细胞48h, RT-PCR和荧光实时定量PCR方法检测EGFR、TGF-β1mRNA表达变化。结果：硼替佐米单药浓度>0.10μg/mL (B2、C2、D2、E2组),对MCF-7具有明显的抑制作用,差异具有显著性(P<0.05),其抑制效果在各作用时间无显著差异(P>0.05)。因而,硼替佐米可一定程度地抑制MCF-7细胞的生长,其抑制作用未呈现出明显的浓度-效应关系和时间-效应关系。表阿霉素单药浓度>0.25μg/mL时(B1、C1、D1、E1组),对MCF-7细胞具有较明显的抑制作用,差异具有显著性(P<0.05),并且其抑制效果随着药物浓度的升高和作用时间的延长而增强,差异具有显著性(P<0.05),从而呈现出明显的浓度-时间-效应关系。另外,与硼替佐米和表阿霉素单药组相比,硼替佐米与表阿霉素联合应用时可以明显提高对MCF-7细胞的抑制作用,且在较低剂量和较短时间产生明显的抑制效果(P<0.05)。细胞周期和凋亡实验结果表明：硼替佐米可使细胞大量停滞在G2-M期；表阿霉素可使细胞大量停滞在S期；此外,B2、B1、C1、B1B2、C1B2各组24h细胞凋亡率分别为9.28%、10.50%、14.10%、12.50%及17.80%,均与对照组(1.74%)有显著差异(P<0.01); b2、b1、c1、b1b2、c1b2各组48h细胞凋亡率分别为11.40%、23.70%、30.60%、25.20%及40.70%,与对照组(4.13%)有显著差异(P<0.01)；并且联合用药组与同等浓度单药组相比,差异具有显著性(P<0.05)。RT-PCR检测结果显示硼替佐米单药以及联合表阿霉素作用于MCF-7细胞后EGFRmRNA表达减弱,但差异不具有显著性(P>0.05),表阿霉素单药作用后EGFRmRNA表达无明显变化；而硼替佐米、表阿霉素单药及联合应用对TGF-β1mRNA表达的影响均无统计学意义(P>0.05)。结论：硼替佐米对MCF-7细胞具有一定的抑制作用,当其与表阿霉素联合应用时可明显提高抑制效果,表明硼替佐米与表阿霉素联合应用可以降低表阿霉素的使用剂量,同时还可提高其化疗敏感性；同时可以抑制细胞周期,促进细胞凋亡,并在一定程度上减弱乳腺癌细胞的侵袭和转移能力,为临床增强化疗效果,降低化疗毒副反应提供了一定的依据。