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目的:研究肿瘤抑制蛋白Rb抑制哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物2 (the mechanistic target of rapamycin complex 2,mTORC2 )的机制及方式 。方法:通过免疫印迹法(WesternBlot)检测Rb基因的敲除小鼠胚胎纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs),多种肿瘤细胞的Rb shRNA稳定株和肿瘤细胞tet-on Rb过表达稳定株的mTOR通路蛋白水平及其磷酸化水平,证实Rb抑制mTORC2活性。通过免疫共沉淀(co-immunoprecipitate,Co-IP), GST 沉降(GSTpull down),凝胶过滤层析(gel filtration chromatography)等方法证实Sin1为Rb的作用蛋白。将全长Sin1载体通过分子克隆片段化为N、CRIM、RBD和PH四个结构域,证实PH结构域为Rb作用的靶点。结果:与Rbloxp/loxpMEFs相比,Rb-/-MEFs显示出增加的Akt Ser 473的磷酸化水平,提示其mTORC2功能增加,而反映mTORC1功能的S6K Thr389磷酸化水平未见明显变化,提示Rb特异性抑制mTORC2功能。肿瘤细胞宫颈癌细胞系HeLa,卵巢癌细胞系OVCAR5和乳腺癌细胞系MDA-MB-231 Rb shRNA稳定细胞株中进一步确认Rb特异性抑制mTORC2活性,而不影响mTORC1活性。在pTRIPZ-HA-Rb OVCAR5细胞株中,加入强力霉素(doxycycline)诱导Rb的表达,发现Rb表达水平的增加伴有Akt Ser473的磷酸化水平的下降。过表达Rb进行Co-IP以及全内源Co-IP提示Sin1为mTORC2复合物中唯一与Rb结合的蛋白,且Sin1-PH结构域为Rb作用的靶点。结论:Rb通过结合Sin1-PH结构域特异性抑制mTORC2活性,而不影响mTORC1活性。