【摘 要】
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许多微生物能够降解异源物质,而且这些降解作用的酶通常编码在质粒上。完全消除质粒的细菌与质粒存在的原始菌株比较,可以观察研究质粒的遗传学功能。本文的Pandoraea sp.strai
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许多微生物能够降解异源物质,而且这些降解作用的酶通常编码在质粒上。完全消除质粒的细菌与质粒存在的原始菌株比较,可以观察研究质粒的遗传学功能。本文的Pandoraea sp.strain MCB032可以以氯苯为唯一碳源生长,含有一个较大的质粒。通过电转质粒pRK415到野生型菌株中,挑选到了质粒消除菌株。通过野生型与突变型菌株的质粒提取实验、底物利用能力实验、PCR检测氯苯双加氧酶基因等证明菌株MCB032中的两个与氯苯降解有关的基因簇定位在这一个较大的质粒上。质粒pVLT31与pRK415的复制子不同,电转pVLT31到菌株MCB032中,不会发生质粒消除,即不影响菌株利用底物氯苯的能力。
近年来研究污染物降解菌中的关键降解基因,构建多功能降解菌的研究被认为是解决污染问题的重要措施。将2-氯硝基苯(2CNB)降解菌Pseudomonasstutzeri ZWLR2-1中的2CNB双加氧酶的大小亚基基因(cnbAcAd)和氧还蛋白基因(cnbfer)克隆到质粒pRK415上,将构建的质粒接合转移到Cupriavidusnecator JMP134中,得到了可以生物转化2CNB和3-氯硝基苯(3CNB)的工程菌。为了得到能稳定遗传的基因工程菌,将基因cnbAcAd和cnbfer克隆到转座子载体pUT mini-Tn5(Ampr Kanr)中,得到重组质粒pZWCNB5。通过转座将基因cnbfer AcAd插入到JMP134基因组中,得到一株可以生物转化2CNB和3CNB的工程菌。
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